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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/6169
Title: | 建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法偵測家禽白血病病毒A亞群與J亞群 Development of reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification for the detection of subgroup A and subgroup J Avian Leukosis Viruses |
Authors: | Po-Hsaing Wang 王柏翔 |
Advisor: | 王金和(Ching-Ho Wang) |
Keyword: | 家禽白血病病毒A亞群,家禽白血病病毒J亞群,反轉錄恆溫環形核酸增幅法,恆溫增幅技術,臨場檢測, subgroup A avain leukosis virus (ALV-A),subgroup J avain leukosis virus (ALV-J),reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP),isothermal amplification technology,in-field test, |
Publication Year : | 2013 |
Degree: | 碩士 |
Abstract: | 家禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)為雞隻感染反轉錄病毒之常見病原,能引起雞隻產生腫瘤性疾病,並造成家禽產業嚴重的經濟損失。外源性家禽白血病病毒可被區分成六個亞群(A-E和J),其中A亞群與J亞群是台灣最常見的家禽白血病病毒。本研究目的是建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)偵測家禽白血病病毒A亞群與J亞群,以達到快速、準確且敏感之應用。
設計4條RT-LAMP專用特異性引子去偵測家禽白血病病毒pol基因與env基因保守區上的6段序列,測試不同條件下的RT-LAMP反應,找出最適當反應條件,並以不同家禽病原測試RT-LAMP之專一性與用已定量ALV核酸RNA 10倍連續序列稀釋比較RT-LAMP與one-step RT-PCR偵測ALV-A與ALV-J之敏感性。 本研究所設計之RT-LAMP可正確增幅ALV-A與ALV-J且不會與其他家禽致病原進行非特異性增幅,也不與不同亞群ALV進行增幅,且所發展RT-LAMP偵測ALV之敏感性也比一步反轉錄聚合酶鍊鎖反應(one-step RT-PCR)高10倍至100倍。此外,於反應後加入核酸染劑SYBR Green,可方便肉眼判讀反應結果。從本研究實驗結果可推斷,所建立的RT-LAMP能快速、敏感且專一地偵測ALV-A與ALV-J,所以RT-LAMP確實有其潛力應用於家禽白血病病毒之大規模檢測,並能成為幫助台灣家禽產業清除外源性家禽白血病病毒之檢測工具。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/6169 |
Fulltext Rights: | 同意授權(全球公開) |
Appears in Collections: | 獸醫學系 |
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