建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法偵測家禽白血病病毒Ａ亞群與Ｊ亞群

Abstract

家禽白血病病毒（Avian leukosis virus, ALV）為雞隻感染反轉錄病毒之常見病原，能引起雞隻產生腫瘤性疾病，並造成家禽產業嚴重的經濟損失。外源性家禽白血病病毒可被區分成六個亞群（A-E和J），其中A亞群與J亞群是台灣最常見的家禽白血病病毒。本研究目的是建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法（RT-LAMP）偵測家禽白血病病毒A亞群與J亞群，以達到快速、準確且敏感之應用。 設計4條RT-LAMP專用特異性引子去偵測家禽白血病病毒pol基因與env基因保守區上的6段序列，測試不同條件下的RT-LAMP反應，找出最適當反應條件，並以不同家禽病原測試RT-LAMP之專一性與用已定量ALV核酸RNA 10倍連續序列稀釋比較RT-LAMP與one-step RT-PCR偵測ALV-A與ALV-J之敏感性。 本研究所設計之RT-LAMP可正確增幅ALV-A與ALV-J且不會與其他家禽致病原進行非特異性增幅，也不與不同亞群ALV進行增幅，且所發展RT-LAMP偵測ALV之敏感性也比一步反轉錄聚合酶鍊鎖反應（one-step RT-PCR）高10倍至100倍。此外，於反應後加入核酸染劑SYBR Green，可方便肉眼判讀反應結果。從本研究實驗結果可推斷，所建立的RT-LAMP能快速、敏感且專一地偵測ALV-A與ALV-J，所以RT-LAMP確實有其潛力應用於家禽白血病病毒之大規模檢測，並能成為幫助台灣家禽產業清除外源性家禽白血病病毒之檢測工具。