請用此 Handle URI 來引用此文件:
http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/6169
完整後設資料紀錄
DC 欄位 | 值 | 語言 |
---|---|---|
dc.contributor.advisor | 王金和(Ching-Ho Wang) | |
dc.contributor.author | Po-Hsaing Wang | en |
dc.contributor.author | 王柏翔 | zh_TW |
dc.date.accessioned | 2021-05-16T16:22:19Z | - |
dc.date.available | 2015-07-30 | |
dc.date.available | 2021-05-16T16:22:19Z | - |
dc.date.copyright | 2013-07-30 | |
dc.date.issued | 2013 | |
dc.date.submitted | 2013-07-23 | |
dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/6169 | - |
dc.description.abstract | 家禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)為雞隻感染反轉錄病毒之常見病原,能引起雞隻產生腫瘤性疾病,並造成家禽產業嚴重的經濟損失。外源性家禽白血病病毒可被區分成六個亞群(A-E和J),其中A亞群與J亞群是台灣最常見的家禽白血病病毒。本研究目的是建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)偵測家禽白血病病毒A亞群與J亞群,以達到快速、準確且敏感之應用。
設計4條RT-LAMP專用特異性引子去偵測家禽白血病病毒pol基因與env基因保守區上的6段序列,測試不同條件下的RT-LAMP反應,找出最適當反應條件,並以不同家禽病原測試RT-LAMP之專一性與用已定量ALV核酸RNA 10倍連續序列稀釋比較RT-LAMP與one-step RT-PCR偵測ALV-A與ALV-J之敏感性。 本研究所設計之RT-LAMP可正確增幅ALV-A與ALV-J且不會與其他家禽致病原進行非特異性增幅,也不與不同亞群ALV進行增幅,且所發展RT-LAMP偵測ALV之敏感性也比一步反轉錄聚合酶鍊鎖反應(one-step RT-PCR)高10倍至100倍。此外,於反應後加入核酸染劑SYBR Green,可方便肉眼判讀反應結果。從本研究實驗結果可推斷,所建立的RT-LAMP能快速、敏感且專一地偵測ALV-A與ALV-J,所以RT-LAMP確實有其潛力應用於家禽白血病病毒之大規模檢測,並能成為幫助台灣家禽產業清除外源性家禽白血病病毒之檢測工具。 | zh_TW |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-05-16T16:22:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-102-R00629003-1.pdf: 1385393 bytes, checksum: a0f0e4a9e7328b46409b27cc74d43df2 (MD5) Previous issue date: 2013 | en |
dc.description.tableofcontents | 誌謝 i
中文摘要 ii Abstract iii 第一章 緒言 1 第二章 文獻探討 3 第一節 家禽白血病歷史背景與簡介 3 第二節 病毒形態與特性 3 第三節 病毒結構與功能 4 2.3.1. 病毒基因體 4 2.3.2. 病毒蛋白質 5 第四節 病毒複製 6 2.4.1. 形成前病毒(provirus) 6 2.4.2. 病毒的轉錄與轉譯 6 2.4.3. 病毒核酸重組 7 第五節 家禽白血病病毒宿主與亞群分類 8 2.5.1. 宿主特異性與病毒亞群 8 2.5.2. 病毒抗原與分子特性 9 第六節 病毒傳播途徑 10 2.6.1. 外源性病毒 10 2.6.2. 內源性病毒 10 第七節 臨床症狀與病理變化 11 2.7.1. 致癌性與潛伏期 11 2.7.2. 臨床症狀 12 2.7.3. 病理變化 13 第八節 免疫 13 2.8.1. 主動免疫 13 2.8.2. 被動免疫 14 第九節 診斷方式 14 2.9.1. 病毒分離與病原鑑定 14 2.9.2. 病毒核酸偵測 15 2.9.3. 血清學抗體抗原檢測 15 第十節 流行病學 16 2.10.1. 發生率 16 2.10.2. 家禽白血病病毒在台灣的研究概況 16 2.10.3. 疾病預防與防治 17 第十一節 恆溫環形核酸增幅法(Loop-mediated isothermal Amplification, LAMP) 19 2.11.1. 恆溫環形核酸增幅法之原理 19 2.11.2. LAMP產物之檢測 21 2.11.3. LAMP與RT-LAMP應用與研究現況 21 第三章 材料與方法 23 第一節 以PCR與RT-PCR偵測田間家禽白血病病毒(ALV)核酸 23 3.1.1. 樣材與來源 23 3.1.2. 樣本DNA萃取 23 3.1.3. 樣本RNA萃取 23 3.1.4. 反轉錄反應(RT) 24 3.1.5. 聚合酶鏈鎖反應(PCR) 25 3.1.6. 洋菜膠電泳分析 25 第二節 純化家禽白血病J亞群病毒 26 3.2.1. 家禽白血病J亞群病毒受汙染確認 26 3.2.1.1. 細胞培養 26 3.2.1.2. 計算細胞數目 27 3.2.1.3. 病毒增殖 27 3.2.1.4. 聚合酶鏈鎖反應(PCR) 27 3.2.2. 抗血清處理被污染病毒液試驗 28 3.2.2.1. 中和反應 28 第三節 建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)偵測家禽白血病病毒(ALV)核酸 28 3.3.1. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)之引子設計 29 3.3.1.1. 家禽白血病A亞群病毒之引子設計 29 3.3.1.2. 家禽白血病J亞群病毒之引子設計 29 3.3.2. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP) 29 3.3.3. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)產物之分析 30 3.3.3.1. 洋菜膠體電泳分析 30 3.3.3.2. 焦磷酸鎂(magnesium pyrophosphate)沉澱分析 30 3.3.3.3. SYBR Green I核酸染劑分析 31 3.3.4. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)之專一性檢定(Specificity test) 31 3.3.4.1. 家禽病原核酸確認 31 3.3.4.2. 家禽白血病病毒核酸存在於其他家禽病原之確認 31 3.3.4.3. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法之專一性檢定 32 第四節 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)與一步反轉錄聚合酶鏈鎖反應(one-step RT-PCR)之偵測比較 32 3.4.1. 設計一步反轉錄聚合酶鏈鎖反應(one-step RT-PCR) 32 3.4.2. 病毒核酸之萃取 33 3.4.3. 病毒核酸之定量 33 3.4.4. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)敏感性測試 33 3.4.5. 一步反轉錄聚合酶鏈鎖反應(one-step RT-PCR)敏感性測試 34 3.4.6. 雞隻田間樣本偵測能力比較 34 第四章 結果 35 第一節 以PCR與RT-PCR偵測田間家禽白血病病毒(ALV)核酸 35 第二節 純化家禽白血病J亞群病毒 35 4.2.1. 家禽白血病J亞群病毒之汙染確認 35 4.2.2. 抗ALV-A之抗血清處理被污染病毒液 35 第三節 建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)偵測家禽白血病病毒(ALV)核酸 36 4.3.1. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)之引子設計 36 4.3.1.1. 家禽白血病A亞群病毒之引子設計 36 4.3.1.2. 家禽白血病J亞群病毒之引子設計 37 4.3.2. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP) 37 4.3.3. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)產物之分析 37 4.3.3.1. 洋菜膠體電泳分析 37 4.3.3.2. 焦磷酸鎂(magnesium pyrophosphate)沉澱分析 37 4.3.3.3. SYBR Green I核酸染劑分析 38 4.3.4. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)之專一性檢定(Specificity test) 38 4.3.4.1. 家禽病原核酸確認 38 4.3.4.2. 家禽白血病病毒核酸存在於其他家禽病原之確認 38 4.3.4.3. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法之專一性檢定 38 第四節 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)與一步反轉錄聚合酶鏈鎖反應(one-step RT-PCR)之偵測比較 39 4.4.1. 反轉錄恆溫環形核酸增幅法(RT-LAMP)與一步反轉錄聚合酶鏈鎖反應(one-step RT-PCR)敏感性測試 39 4.4.2. 雞隻田間樣本偵測能力比較 39 第五章 討論 40 第六章 參考文獻 65 | |
dc.language.iso | zh-TW | |
dc.title | 建立反轉錄恆溫環形核酸增幅法偵測家禽白血病病毒A亞群與J亞群 | zh_TW |
dc.title | Development of reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification for the detection of subgroup A and subgroup J Avian Leukosis Viruses | en |
dc.type | Thesis | |
dc.date.schoolyear | 101-2 | |
dc.description.degree | 碩士 | |
dc.contributor.oralexamcommittee | 鄭益謙,沈瑞鴻,謝快樂,張伯俊 | |
dc.subject.keyword | 家禽白血病病毒A亞群,家禽白血病病毒J亞群,反轉錄恆溫環形核酸增幅法,恆溫增幅技術,臨場檢測, | zh_TW |
dc.subject.keyword | subgroup A avain leukosis virus (ALV-A),subgroup J avain leukosis virus (ALV-J),reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP),isothermal amplification technology,in-field test, | en |
dc.relation.page | 77 | |
dc.rights.note | 同意授權(全球公開) | |
dc.date.accepted | 2013-07-23 | |
dc.contributor.author-college | 獸醫專業學院 | zh_TW |
dc.contributor.author-dept | 獸醫學研究所 | zh_TW |
顯示於系所單位: | 獸醫學系 |
文件中的檔案:
檔案 | 大小 | 格式 | |
---|---|---|---|
ntu-102-1.pdf | 1.35 MB | Adobe PDF | 檢視/開啟 |
系統中的文件,除了特別指名其著作權條款之外,均受到著作權保護,並且保留所有的權利。