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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/17150
標題: | 探討SIRT6 於hEGFRT790M CL1-0 Gefitinib 抗藥性細胞株所誘導之EMT 抑制角色 The inhibitor role of SIRT6 in the EMT induced by Gefitinib-resistant hEGFRT790M CL1-0 cell line |
作者: | Jia-Hui Shen 沈嘉輝 |
指導教授: | 游偉絢 |
關鍵字: | 肺腺癌,癌症轉移,抗藥性, NSCLC,metastasis,Gefitinib-resistant, |
出版年 : | 2013 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 文獻指出肺癌為2011年癌症死因之首,而其中以非微小細胞肺癌(Non small cell lung cancer,簡稱NSCLC)比例為大多數,約有8成之多。研究發現,NSCLC之成因與過度活化之EGFR pathway有極高之關聯性,其中以EGFR tyrosine kinase domain之變異(以L858R為主)為主要因素,因此目前臨床上用治療NSCLC之small molecules主要為tyrosine kinase inhibtors (簡稱TKIs)如Gefitinib、Erlotinib等為主要用藥,但研究卻發現,經上述藥物治療後,患者出現第2種適應型tyrosine kinase domain mutant T790M,而此種變異能大幅降低TKIs之治療效果,產生具抗藥性之癌細胞,因此要如何對抗此種變異所帶來之抗藥性問題,為目前最為棘手之議題。研究指出,過度活化之EGFR pathway能促進cancer metastasis來造成NSCLC患者之死亡,而主要因素為誘導Epithelial–Mesenchymal Transition(簡稱EMT )過程之進行,也因此若能抑止EMT之進行,或許就能克服TKIs之抗藥性問題來治療NSCLS患者。Sirtuin 6 (簡稱SIRT6) 為Sirtuin protein family之一員。先前文獻指出,SIRT6能將histone 3 acetylated-lysine 9進行去乙醯基化,進而干擾NF-kB之作用;且有文獻指出,SIRT6在肝癌發展過程中有重要之角色,其能誘導不正常之肝細胞死亡,顯示其或許具有抗癌之功能。因此在本次實驗中將探討SIRT6在hEGFR790M mutant cancer cell之功能為何。
在一開始先建立出能感應EMT進行之Thrombomodulin promoter eGFP vector ( TMp EGFP vector ) CL1-0 cell line,接著將 pBABE puro wt-hEGFR vector、pBABE puro hEGFR T790M vector分別轉殖入上述之cell line,後以抗生素puromycin篩選後,得到TMp eGFP / wt-hEGFR、TMp eGFP / hEGFRT790M CL1-0 cell line。以EGF (50ng/ml)處理24小時後發現,TMp eGFP/wt-hEGFR CL1-0之eGFP signal有增強之情況;而TMp eGFP/hEGFRT790M CL1-0則無論有無處理EGF,都有明顯之eGFP signal,此結果表示eGFP signal之強弱能代表EGFR pathway活化程度,而eGFP signal也與EMT marker SNAIL之入核比例有正相關性。將SIRT6-pDsred expression C1 vector轉殖入上述cell line後發現,若有表現出SIRT6-Dsred fusion protein則eGFP signal有弱化甚至消失之結果;另以Western blotting檢測後也發現SIRT6 protein之含量在CL1-0相對較高,而CL1-5相對偏少,顯示SIRT6與cancer invasive progression確實有關聯性;而MMP7 (為促進EMT進行之重要因子) 在TMp EGFP/hEGFRT790M CL1-0、CL1-5中gene expression也確實較高。以Dual luciferase assay檢測後發現,若表現出SIRT6-Dsred fusion protein,則能降低MMP7 luciferase signal,最後將此重組之vector送入CL1-5後也發現到MMP7之gene expression有下降之趨勢,綜合藉由上述結果,認為SIRT6能降低MMP7之gene expression來抑止EMT之進行。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/17150 |
全文授權: | 未授權 |
顯示於系所單位: | 生物化學暨分子生物學科研究所 |
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