鹼蛋白水解酵素之純化及基本性質探討

Abstract

蛋白水解酵素在工業上的大量運用，使得其基本性質的研究益形重要；瞭解其勝?一級結構、水溶液及有機溶劑中的穩定性和反應機制等，可使我們更能有效的掌控這些酵素。 本論文使用的五種蛋白水解酵素（ alcalase ，三種從枯草桿茵 CCRC 11594 , CCRC 14353 及 CCRC 15413 發酵而得，另一種從絲狀?菌 Conidiobolus coronatus發酵而得），都能從微生物大量分泌取得。將這些酵素經過 TSK CM－650 ( S )陽離子交換層析及 DEAE 5PW 陰離子交換層析純化後，都能得到大於百分之九十的純度。經由實驗結果，五種酵素都屬於絲氨酸型的鹼蛋白水解酵素，活性pH值 9－10 時達到最高點。其在水溶液中的穩定性 ， PH 6.2 大於pH 8.0 ；而在不同含水量的乙醇溶液中，並未能看出含水量與穩定性的關係，但可看出在乙醇溶液中的穩定性比在水溶液中好（七天仍能保持大於百分之七十的活性）；因此，本論文中所使用的五種鹼蛋白水解酵素，不僅適用於各種工業用途（清潔劑的添加物、食品製造業. . . . . .等），也是研究酵素在有機溶劑中反應的良好題材。 本論文另一主題為研究合成 L－malic acid 的方法，由 fumarase 及 aspartase兩種酵素連續催化，可得到百分之八十四的 L－malic acid 及百分之十五點七的 L－aspartic acid ，而反應基質（ substrate ) fumarate則僅剩百分之零點三；利用丙酮萃取，可完全將 L－malic acid 及 L－aspartic acid 分離，得到純度甚高的 L－malic acid 。