Vibrio anguillarum之細胞外蛋白?的純化及其性質之探討

Abstract

本研究中利用採自宜蘭五結鄉健康養殖草蝦肝胰臟的Vibrio anguillarum UAH－3．以各種不同的生理環境，包括不同鹽度、PH值溫度及營養度等來培養，並進行其細胞外蛋白?的純化及各項形質分析，結果發現分別在鹽度30?、pH9、溫度20℃時供試菌株產生之蛋白?具有最高的活性。細胞外產物經Sephadex G－200 column分離得到兩種蛋白?，其分子量分別為82k及 64k。經測試各項性徵實驗，發現其最適合作用的溫度為 45℃，最適合的 PH 值為7，經60℃加熱10分鐘即失去活性。在抑制劑（ inhibitor ）的測試中，1,10-phenaethroline及 ethylenediamine tetraacetic acid(EDTA）對其有抑制作用，phenylmethanesulphonyl fluoride( PMSF ),pefoloc SC, pepstatinA及leupeptin則否，証實為metalloprotease，且其蛋白?活性與 Ca 2+及Mg2+有關。 純化後的蛋白?對草蝦的毒性試驗結果，會造成注射部位的肌肉壞死，在顯微鏡下肌肉組織有明顯的壞死灶，周圍並出現血淋細胞浸潤及結締組織增生等現象，隨著接種時間的延長，炎症反應的範圍有擴大的趨勢。