文蛤病毒轉錄及複製過程及加帽酵素之研究

Abstract

文蛤水產呼腸孤病毒（CAV）為本研究室於民國七十五年自文蛤體內所分離出來。本論文分為二部份：（一）研究病毒複製及轉錄的過程，以瞭解病毒的生活史，期能發展出有效的防治方法。利用「32P」-Orthophosphate標定病毒RNA，再以3％Agarose-urea gel分析，發現在感染後18小時才有RNA的合成，且合成量隨時間增長而漸增；再用S1-Nuclease處理不同時間標定的RNA，以10％SDS-PAGE分析發現，在感染後18小時即有dsRNA出現。此外，自培養液回收病毒，發現在感染後36小時才有標定之病毒釋出。由以上可知CAV自感染細胞後12-18小時之間開始轉錄及複製，而在感染後36小時才開始將病毒顆粒釋出，所以一個病毒複製循環需時約36小時；在感染後12小時之前均無標定之病毒RNA出現，故推測CAV感染細胞後應有一段大約為12小時的潛伏期，目標是由病毒total RNA的放射量與dsRNA的比較，推測應先轉錄後複製。（二）探討CAV之Guanylyltransferase的特性。CAV的病毒結構蛋白λ2，可與GTP形成GMP-λ2複合體，故推測λ2具有Guanylyltransferase的功能。GMP-λ2複合體的形成受時間，溫度，病毒蛋白量，二價離子濃度等因素影響，且受焦磷酸（Pyrophosphate），DTT（dithiothreitol），Sodium Phosphate等分子抑制。若加入活體外轉錄之RNA，或RNA Ladder，均會使GMP-λ2複合體消失，且GMP被轉移至RNA上，故確定λ2具有加帽酵素之Guanylyltransferase的功能。