最後成熟過程中泥鰍卵細胞對促性腺激素反應之研究

Abstract

促性腺激素（gonadotropin）有促進魚類排卵（ovulation）以至產卵（oviposition）的功能。本研究以離體（in vitro）試驗的方法探討在最後成熟（final maturation）過程中各主要時期，卵核偏中央（subperipheral ）期、卵核移動前期（the early stage of germinal vesicle migration ）、卵核移動後期（ the late stage of germinal vesicle migration ）、卵核破裂（ germinal vesicle breakdown , GVBD）期的泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）卵細胞（oocyte ) 對人類絨毛膜促性腺激素（ human chorionic gonadotropin , HCG ）不同劑量： 0.01 、0.1 、0.5 、1、5μg/m1 的刺激反應。以卵細胞內每單位蛋白質環腺核甘單磷酸（cyclic AMP）的累積量作為反應程度的指標。目的在藉以瞭解 HCG 對於誘導及控制卵細胞最後成熟的機制，以期作為人工促進產卵技術之建立及應用的依據。自牛腎上腺抽取分離所得的結合蛋白質（binding protein）其專一性（specificity）足以精確測定 cyclic AMP 之含量。環腺核甘單磷酸含量的測定乃是利用競爭性蛋白質結合原理（the principle of competitive protein binding ）為基礎的環腺核甘單磷酸結合蛋白分析法（cyclic AMP binding protein assay ）。蛋白質的測定則用 Lowry method 。為了精確測定未知濃度的 cyclic AMP ，建立可靠之分析方法，對 cyclic AMP 結合蛋白質的特性進行一連串的實驗。其結果為結合蛋白質對 cyclic AMP 有專一性的結合，且有高親和常數（affinity constant ) 其值為 3.22×l0-9 及低結合容量（binding capacity ）其值為 2.71 picomole ／mg protein 。環腺核甘單磷酸結合蛋白分析法的最適條件為培養溫度4℃；培養時間三小時；氚標誌環腺核甘單磷酸（3H-cAMP）含量為5nCi ；結合蛋白質由原液稀釋到可達32.9％結合度的濃度（本實驗為1.14mg protein/m1); cyclic AMP 含量的測定範圍在0.25 pmole 與 10pmole之間（結合度 81.18-23.17% ）。在卵細胞最後成熟過程中，泥鰍卵細胞對於HCG的離體作用，僅在卵核偏中央期有明顯的反應，即隨著 HCG 濃度的增加，每單位蛋白質 cyclic AMP 的累積量有增加的趨勢。至於卵核移動前期及後期和卵核破裂期的卵細胞對HCG 的反應有消失的現象。就生理調控機制的觀點，其可能的原因有（一）促性腺激素（HCG）對於促性腺激素接受器（HCG receptor）的抑制調節（down regulation）或（二）促性腺激素接受器在處理前已達飽和（saturation）。就生理的意義而言，表示促性腺激素控制最後成熟的重要性，已為其他激素（hormone）或類固（steroid）等取代。