人類紅血球蔔萄糖六磷酸去氫?之純化與其同功?性質的研究

Abstract

利用親和性管柱，配合DEAE-Sephadex A-50與CM-Sephadex C-50離子交換層析，我們成功地純化出人類紅血球中之六磷酸去氫?(G6PD)。當使用SDS-膠體電泳鑑定其純度時，只看到單一蛋白質色帶，分子量約為55 Kd。不含SDS之非連續電泳膠體中，其活性染色與蛋白質染色之色帶均為單一，且位置相同。由以上結果可判斷其為純質(Homogeneous)。 在含1M Urea, 6% Acrylamide之等電荷焦集電泳(Isoelectrofocusing，IEF)中，純質G6PD亦如同粗質G6PD般有7個同功?，且pI值相同，但在1M Urea之中，均質G6PD活性較低。 利用銀染色測定各同功?蛋白質相對量，再與由活性染色所測得之相對活性相比，我們可以求出其中4個同功?之相對單位質量活性(Relative specific activity)。 再與同功?之動力參數相比較，可知還原NADP+能力越強之同功?，其相對活性越高，且除pI6.59的同功?(Band 1)外，pI值高者之活性高於pI值低者。