小白鼠儲精囊分泌SIS I蛋白之研究

Abstract

MpSv-2基因被證實在小鼠的儲精囊表現，其表現受到了雄性素的刺激，而儲精囊是小鼠體內唯一表現MpSv-2基因的器官。MpSv-2基因cDNA序列一共有2733鹼基對，其中包含一個完整的ORF含有2463鹼基對，可以轉錄含有820個胺基酸的蛋白質，推估分子量為90,200 Da。完成MpSv-2基因的基因組序列分析發現，MpSv-2基因一共含有5個 exon及4個intron。在延伸至2002個鹼基的啟動子區域序列中，以電腦軟體分析得到6個可能的雄性素反應單元，l個在啟動子區域、2個在第1個exon中、3個在第2個intron中。 MpSv-2基因所轉譯的蛋白透過電腦分析，發現極有可能是分泌性蛋白，且其估計分子量與小鼠儲精囊分泌性蛋白SVS I很接近，以胰蛋白?分解SVS I後進行MALDI-TOF質譜分析各片段之分子量，證實了SVS I是MpSv-2基因所轉譯的蛋白。由免疫組織染色實驗證實了SVS I是由儲精囊表皮細胞所分泌，並且儲存於儲精囊腔道中。經由轉麩胺醯?所催化的交聯實驗證實，SVS I蛋白可以與SVSⅡ以及SVSⅢ一起被作用而形成高分子聚合物， SVSⅠ蛋白為轉麩胺醯?受質之一。

The genomic structure of MpSv-2, a novel androgen-regulated gene exclusively expressed in mouse seminal vesicle, was analyzed to establish a 5-flanking region of 2002 bp, five exons of 2038、277、 134、139 and 133 bp and 4 introns of 1060、278、240 and 509 bp. The length of MpSv-2 cDNA is 2733bp. The putative MpSv-2 translate protein contains 820 amino aids that sum to give a molecular mass of 90,200 Da. The translate protein was predicted to a secretory protein and the molecular mass of MpSv-2 translate protein is similar to mouse seminal vesicle secretion protein SVS Ⅰ. Trypsin digestion of SVS Ⅰand MALDI-TOF mass spectral analysis supported this protein as derived from MpSv-2. SVSⅠwas immuolocalized to both the epithelium of the primary and secondary folds of the seminal vesicle.All of mouse SVSⅠ-Ⅲ were proven to be substrates of transglutaminase and could be cross-linked readily after the enzyme reaction.