建立篩選第二型糖尿病新治療藥物-選擇性SGLT2抑制劑-之細胞平台

Abstract

糖尿病(DM)為盛行全球的慢性病，至今超過1.5億人口患病，且有90%屬於第二型糖尿病(T2DM)。如何有效治療控制糖尿病，嚴然已成為不可忽略之重要課題。SGLT為鈉離子依賴型葡萄糖運輸蛋白，主要有SGLT1與SGLT2型態，為生理上為葡萄糖之吸收與再吸收作用。而具有選擇性SGLT2抑制劑可阻斷葡萄糖再吸收作用，被視為能有效控制血糖以開發為T2DM新穎治療藥物。 我們嘗試建立活體外之篩選系統，利用短暫表達hSGLT1之COS-7細胞株與穩定表達hSGLT2之CHO-K1細胞株為篩選系統之主要架構。透過傳統以輻射性標定受質(14C-AMG：14C-methyl-α-D-glucopyranoside)與螢光標定受質1-NBDG (2-[N- (7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol- 4-yl)amino]- 1-deoxy-D-glucose)及2-NBDG (2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-D-glucose)進行glucose uptake assay篩選出選擇性SGLT2抑制劑。 本系統測試Phlorizin、Dapagliflozin、Core-1及Core-2四種不同化合物。 Phlorizin對SGLT1與SGLT2皆具抑制活性，已知Dapagliflozin為已知對SGLT2有高度選擇抑制性，作為實驗正向控制組。。Core-1與Core-2為我們測試的兩個化合物。由結果得知，Core-1 (SGLT1 IC50 = 12.46 μM; SGLT2 IC50 = 0.72 nM)與Dapagliflozin(SGLT1 IC50 = 1.62 μM; SGLT2 IC50 = 0.28 nM)有相近的抑制活性。Core-2則不具任何明顯活性。 由實驗結果證明我們成功建立篩選選擇性SGLT2抑制劑之活體外系統，此系統不但可篩選其抑制劑，並可利用建立系統架構之SGLT1與SGLT2進行其詳細功能性探討。