探討硫氫氧化酶對於男性⽣殖功能之影響與調控機制

Abstract

精母細胞生成於睪丸中，但其需要歷經一系列的發育與成熟化過程以具備成整的受精能力，進而與卵子結合完成受精之使命。在生精作用後期，高度濃縮的染色質使得精子喪失轉錄功能，因此，精子高度仰賴著後轉錄/譯修飾調控機制，以完成發育與獲能。早在西元1989年，硫基的氧化作用（sulfhydryl oxidation）已被指出其高度反應於精子成熟化過程，然而，其中的分子機制仍未被全面的了解。此論文將針對一特殊的硫氫氧化酶家族稱Quiescin Sulfhydryl Oxidases簡稱QSOXs對於精子生理影響、精子成熟化微環境的佈局以及其上游調控機制的探討。 首先，我們發現了亞型QSOX1c和QSOX2分別在附睪有著特殊的組織分佈、分泌機制和與精子的交互作用。QSOX1c均勻散佈於附睪中後段的上皮細胞內與細胞外管腔中，而大部分的QSOX2蛋白質則高度表現於附睪前段的高基氏體中，顯示恰為相反的組織分佈。另外，獨有QSOX2在附睪小囊泡（epididymosome）被發現，闡明出QSOX2透過非典型的分泌系統頂端分泌（apocrine secretion）以釋出於附睪管腔中。最後利用免疫螢光表面標的技術發現，QSOX1c於精子的頂體與尾部有著特殊的黏附，而QSOX2於精子頭部尾端的植入窩（implantation fossa）有著特定的親和。綜合以上的發現，我們首度揭露了QSOX1c和QSOX2分別對附睪精子成熟化的潛在功能。 另外，QSOX1c也大量的表現於儲精囊中，因此，我們試著從儲精囊液中純化QSOX1c以建立體外的精子培養系統，以更近一步探討QSOX1c對於精子之影響。結果顯示，當精子培養於QSOX1c添加培養液中，可預防早發性的獲能反應和頂體反應。另外一方面，QSOX1c能促進精子聚集的發生，其中，被凝集的精子為大量表現游離硫醇、受到自由基攻擊或是凋亡的不健康精子，此現象也在小鼠與人類活體取得的精子凝集得到相同的證實。這「QSOX1c調節天然的精子篩選平台」期待能應用在臨床上的精子評估系統，進而為繁殖障礙者帶來新的醫療策略。 對於QSOX2的功能性探討，我們利用Cre ERT/LoxP基因剔除技術建立QSOX2剔除小鼠模型。首先，在QSOX2剔除小鼠中，我們發現較小的男性生殖器官包含了睪丸、附睪和儲精囊，而非男性生殖器官如腎臟並沒有發現此差異。經更近一步的生化分析，發現QSOX2剔除小鼠的附睪有著氧化壓力低下的表徵如過低的脂質氧化程度和弱化的穀胱甘肽過氧化物（glutathione peroxidase簡稱GPX）活性，反而硫基的氧化狀態沒有程度上差異，這說明了QSOX2可能主要調節附睪氧化壓力平衡而非硫基的氧化作用。另外一方面，我們藉由體外平台測試GPX對於附睪上皮細胞中QSOX2的影響， 結果顯示GPX的抑制下調了QSOX2的表現量。此研究，從體外與體內研究平台揭示出QSOX2和GPX的相互調節關係，為附睪氧化壓力調節系統加上了新的篇章。另外，在我們先前的研究中顯示在附睪組織發育過程中，QSOX2表現量的高低變化與睪固酮的波動呈正相關，因此，我們建立了不同的動物模型如去勢小鼠、Kiss1基因剔除大鼠，以驗證睪固酮對QSOX2的調節。結果顯示出睪固酮確實對QSOX2有個著正向的調節作用，此外，透過高通量技術與二維的細胞培養平台，我們揭露出睪固酮對於QSOX2的上調必須與足夠的麩胺酸（glutamate）進行協同作用。 結語，此博士論文研究，全面地探討QSOXs對精子生理學的功能影響和首次揭示了於男性繁殖道中非典型的性賀爾蒙調節機制，冀這些發現能奠基繁殖生物學上的認知，也期待為繁殖障礙醫學開啟新的視野。