探討EB病毒產物在不朽化之類淋巴母芽細胞株中透過RLRs路徑對IL-10表現之影響

Abstract

"EB病毒 (Epstein-Barr virus, EBV) 隸屬於人類皰疹病毒科 (Herpesviridae) 中的γ皰疹病毒亞科，並且是第一個被定義與人類腫瘤密切相關的病毒。其感染與多種人類惡性腫瘤及淋巴細胞增生疾病具高度相關性，包含鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma, NPC)、巴氏淋巴瘤 (Burkitt’s lymphoma)、霍杰金氏症 (Hodgkin’s disease) 及移植後淋巴組織增生症 (post-transplant lymphoproliferative disease, PTLD) 等。在體外，EB病毒感染人類B淋巴球細胞後，使其不朽化成具持續增生能力之類淋巴母芽細胞株 (lymphoblastoid cell line, LCL)。 EB病毒為了潛伏於B淋巴球細胞中，會調控許多宿主基因的表現以躲避免疫系統的攻擊。實驗室先前利用cDNA微陣列及細胞激素微陣列分析B淋巴球細胞在EB病毒感染後基因表現及細胞激素變化情形，其中IL-10的表現在EB病毒感染後顯著上升。已知IL-10具有抗發炎反應及促進B淋巴球細胞生長的特性，並且移植病人血清中IL-10表現的提高可作為EB病毒相關之PTLD早期指標，顯示IL-10對於EB病毒相關之PTLD的發生亦扮演重要的角色。本研究欲於PTLD體外模型LCL中探討EB病毒感染B淋巴球細胞後誘導IL-10表現之機制。 在先前的報導中，Dr. Takada等人根據於Akata細胞株之實驗結果提出EBERs經由RIG-I及其下游IRF3誘導IL-10表現之假說。本研究欲探討辨識dsRNA的Retinoic acid-inducible gene-I-like receptors (RLRs) 在LCL中對於IL-10表現之影響，實驗結果發現EB病毒的感染雖不影響RIG-I的表現，但能促進MDA5的表達。進一步以shRNA分別降解RIG-I或MDA5 mRNA後，LCL中IL-10的基因轉錄有下降的趨勢，並且皆能抑制下游訊息傳遞分子TBK1的活化，顯示RIG-I及MDA5的存在對於LCL中IL-10的表現皆是重要的，並可能透過活化下游訊息傳遞路徑促進IL-10之表現。 欲釐清RIG-I及MDA5之活化並誘導IL-10的表現是否由EBERs所引起，在不帶有EB病毒之人類霍杰金氏症細胞株KMH2中轉導EBER1或EBER2皆能促進IL10基因的轉錄，並且於LCL中剔除EBERs基因的表達可抑制IL-10的表現，由此確認了EBERs誘發IL10基因表現的能力。然而，在KMH2表現EBER1及EBER2或是於LCL中剔除EBERs基因的表達對TBK1及IRF3的影響皆不明顯，在本次的實驗中未能證實EBERs誘導IL-10表現之分子機制，EBERs是否為LCL中造成RLRs活化並誘導IL-10表現之分子仍待釐清。 綜合以上實驗結果，本研究發現RIG-I及MDA5對於LCL中IL10基因的表達都是重要的，EB病毒的感染可以誘導MDA5的表現或活化RLRs下游訊息傳遞而可能促進IL-10的表現 ; 另外，我們再次驗證EBERs促進IL-10表現的能力，然而其是否為誘發LCL中RLRs活化以促進IL-10表現之分子仍需要更多驗證。"