奈米氧化金屬顆粒在水體中的行為與青鱂魚之生物有效性及毒性的關係

Abstract

"奈米氧化金屬顆粒（metal oxide nanoparticles, MONPs）具有獨特物化特性而被應用在許多領域中，導致其流佈到環境之中的可能性高，又因為顆粒本身及其釋出的離子皆可能對生物體造成影響，且環境中的離子強度變化、pH值與環境有機物質的存在都可能改變顆粒的行為，進而影響其對水生生物的生物有效性與毒性，，然而目前MONPs在環境中的行為與水生生物的毒性及生物有效性的關聯性仍有許多不明確之處。 本篇研究分成兩大部分，第一部分量測nIn2O3、nFe3O4、nCuO、nPbO2與bPbO2 奈米顆粒在不同環境基質水（SW、MW、HW與SW+HA）的團聚行為、溶解性以及懸浮性，並以體外模擬消化液試驗推測MONPs在生物體內的行為，接著以青鱂魚（Oryzias latipes）幼魚作為模式生物，將其暴露於各MONPs後七日，探討顆粒行為對生物有效性以及毒性之影響。結果顯示，水中離子強度及腐植酸會影響MONPs在水中的聚集、沉降行為與離子釋出量，進而影響青鱂魚幼魚之生物有效性以及毒性，腐植酸會使青鱂魚幼魚之急毒性顯著上升，同時降低顆粒之生物有效性。MONPs在模擬消化道之行為分析結果則顯示，MONPs在消化道環境中溶液釋出離子，且在模擬消化道環境中仍會持續團聚。 第二部分以六月齡之青鱂魚成魚為模式生物，搭配次世代定序（next generation sequencing, NGS）及化學分析技術，探討奈米氧化銦顆粒之生殖毒性機制，並評估顆粒相較於釋出離子是否具有加成的毒性效應。本研究將六月齡的公母成魚配對，並暴露於nIn2O3處理組 (1.0, 20 mg/L)、In3+處理組 (0.010, 1.0 mg/L) 與中硬度水控制組，進行長達21天的暴露實驗，並量測暴露期間的成魚產蛋率以及F1子代之受精率與死亡率，另量測轉錄體的基因表現量、氧化壓力指標以及組織病理學的結果，以了解nIn2O3可能之致毒機制。結果顯示，nIn2O3與In3+處理組之產蛋率相較於控制組並無顯著的差異，F1子代胚胎之死亡率則受nIn2O3影響顯著提高。本研究進一步以感應耦合電漿質譜儀分析成魚鰓、腸、肝與腦的銦含量，結果顯示高濃度顆粒處理組會使鰓、腸與控制組及銦離子處理組相比有更高的銦濃度累積，然而腦與肝的銦含量在各組間無顯著差異。鰓與腸的氧化壓力相關蛋白之活性測試結果顯示，部分蛋白活性在處理組與控制組間有顯著差異（如CAT與GST）。NGS的定序結果搭配基因本體論（gene ontology, GO）分析顯示暴露在較高濃度奈米氧化銦顆粒的青鱂魚的生理節律以及青鱂魚對非生物性外在環境感應之相關基因被顯著干擾，根據KEGG資料庫的比對，則顯示多種和細胞週期、氧化壓力、DNA損傷相關的途徑受到調控，然而暴露在In3+的處理組則有較少的基因受到調控，包括代謝、骨骼肌肉生成或鈣離子結合之相關基因皆可能受到In3+的影響。 綜觀而論，本研究成果連結不同MONPs在水中行為與水生生物毒性之間的關係，並提出能夠顯示奈米顆粒毒性專一性的生物指標，成果將可幫助訂定奈米顆粒的相關規範。"