葡萄糖-六-磷酸去氫?缺乏症的分子診斷與功能分析

Abstract

葡萄糖-六-磷酸去氫?(glucose-6-phosphate dehydrogenase;G6PD;EC 1.1.1.49)缺乏症，是人類常見的遺傳疾病之一。至目前為止，根據生化特性與臨床症狀的標準，已發現了約有400種的變異種．全世界並有約四億的人口受此遺傳疾病的影響，其中中國人亦佔了很大一部份。 而近來G6PD基因DNA序列基本資料的逐步建立，使得我們可以進一步探討G6PD缺乏症的分子機構及功能分析。 由於G6PD缺乏症在台灣亦相當的普遍，因此本實驗與國泰醫院合作，取得具有G6PD活性缺乏的家族血液樣本，利用DNA選殖，DNA定序等方法發現了此家族存在著兩個不同的G6PD point mutation: 分別在487鹼基位置由 G→A，氨基酸變化由Gly→Ser；以及1388鹼基位置由G→A，氨基酸改變為Arg→His。此外，我們並利用PRSM(PCR- mediated restriction site modification method)，快速診斷家族的其他成員，確定此兩個突變為由家族的祖父，祖母所攜帶而遺傳至後代子孫。 在分析完此家族G6PD缺乏症的分子原因之後，我們並利用基因工程及活體外突變形成(in vitro mutagenesis)的方法，構築正常的G6PD以及487,1388的突變系，利用融合蛋白的方法獲得純化的G6PD蛋白進行酵素動力學的研究。初步的研究結果顯示此法所獲得的G6PD相當穩定，並且與直接由血液中分析的結果相近，因此應可以由此繼續作功能上的分析。