草魚腦下腺腎上腺皮質刺激素之初步純化

Abstract

摘要 本實驗的目的在於分離草魚腦下腺腎上腺皮質刺激素（Adrenocorticotropin, ACTH)。 草魚腦下腺以0.1N醋酸萃取，將上層液冷凍乾燥，利用HPLC做初次分離，分別以階梯式滌流，分別收取10％、40％、60％、80％之氰甲烷（含0.07％ TFA)滌流物，其中10?40％氰甲烷（含0.07％ TFA）滌流物具最強之皮質刺激素活性。將此部分冷凍乾燥後，再以HPLC做第二次分離。 第二次分離時，以10?40％氰甲烷（含0.07％ TFA）展開，滌流1.5小時，使最終氰甲烷濃度達於40％。每5分鐘收取一分液，冷凍乾燥後做生物活性測定，其中以F7、F8、F9、F10之活性最強，經劑量效應，以4倍及16倍稀釋，再測生物活性以及測F7?F10之間各吸收?之活性，發現以F8、F9具最強的皮質刺激素活性。分別收集此二部分，匯在一起，冷凍乾燥後以HPLC做第三次分離。 第三次分離時，同樣以第二次HPLC解析條件解析之。將各吸收?回收做生物活性測定，結果得一活性極強且單一之吸收?的物質。