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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/42814
標題: | EB病毒Rta蛋白質活化ATF-2所調控基因的轉錄活性 Activation of ATF2-Mediated Transcription by Rta of Epstein-Barr Virus |
作者: | Ya-Yun Chu 朱雅筠 |
指導教授: | 張麗冠 |
關鍵字: | EB病毒,病毒極早期蛋白質Rta,MCAF1,ATF2,轉錄調控, EBV,Rta,MCAF1,ATF2,transcription regulation, |
出版年 : | 2009 |
學位: | 碩士 |
摘要: | Epstein-Barr virus (EBV) 進入溶裂循環需要病毒極早期基因BRLF1與BZLF1轉錄出Rta與Zta蛋白質協同啟動溶裂循環。Zta可以直接結合上BRLF1的啟動子,Rta卻無法直接結合至BZLF1的啟動子,而是須藉由MAPK、JNK或ERK路徑活化ATF2,讓ATF2結合至ZII區域,促進BZLF1的轉錄。本實驗室先前發現MCAF1能做為Rta與Sp1的中介者,活化基因的轉錄,且在老鼠體內MCAF1的異構物mAM也被證實能與ATF2結合,因此本研究的目的是要探討Rta、MCAF1與ATF2之間的關係。首先利用免疫共沉澱分析與GST pull-down發現MCAF1與ATF2能直接結合,讓Rta透過MCAF1與ATF2形成複合體,且其中ATF2的第1至第119的胺基酸位置與第324到505的胺基酸位置能和MCAF1上的功能性胺基酸區域 Domain 1與Domain 2 結合。然後利用CHIP assay證明Rta-MCAF1-ATF2複合體會結合至含有AP-1結合序列的DNA片段上。接著使用冷光活性分析發現Rta能活化具AP-1序列啟動子的轉錄,且冷光值會隨著ATF2或MCAF1蛋白質表現量增加而上升;而利用dominant negative的ATF2或siRNA抑制MCAF1表現,則Rta活化AP-1序列的能力也被降低。接著透過冷光活性分析發現ATF2或MCAF1的異常表現也會影響Rta活化BZLF1啟動子的轉錄活性,證明Rta確實能以此複合體的形式,結合至BZLF1啟動子的ZII區域,進而促進BZLF1的轉錄。另外,Rta也能促進宿主細胞內BIC mRNA的表現,影響宿主細胞的生理功能。因此本篇研究結果證實Rta能藉由與MCAF1結合影響受ATF2轉錄因子調控基因的轉錄活性,可能對於誘導EBV進入溶裂循環相當重要。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/42814 |
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顯示於系所單位: | 微生物學科所 |
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