以腺嘌呤衍生物為分子模板之整體式分子烙印聚合物管柱的製備及應用

Abstract

I 本研究以9-乙基腺嘌呤(9-ethyladenine)與tri-O-acetyladenosine 為分 子模版，用於製備整體式分子烙印聚合物管柱。其製備方法為將分子模 版、單體、交聯劑與progen 的混合溶液導入預先以γ-MPS 矽烷化之內 徑75 &micro;m 毛細管，在聚合起始劑催化下聚合，接著利用針筒通入甲醇與 醋酸之混合溶液萃取分子模版。將所製備的管柱分別應用於核苷酸鹼 基、核苷以及核苷酸混合物的分離。對於核苷酸鹼基，在不同pH 值(4~9) 磷酸緩衝溶液，其滯留順序為cytosine > thymine > guanine > adenine，結 果顯示孔洞對adenine 有較強的滯留力，guanine 次之，thymine 與cytosine 較無明顯的滯留。核苷酸鹼基混合物最佳化分離條件為分離電壓15 kV，磷酸緩衝溶液(10 mM, pH 4)，相同管柱連續注入4 次其滯留時間的 RSD 值< 4% ，平均理論板數為3165 m-1。繼而應用於核苷混合物的分 離，在pH 值(7~8)時，核苷所帶的有效電荷接近，故adenosine 滯留較 顯著。核苷混合物最佳化分離條件為分離電壓15 kV，磷酸緩衝溶液(10 mM, pH 8)，相同管柱連續注入4 次其滯留時間RSD 值< 2.5%，平均理 論板數12169 m-1。對於核苷酸混合物，在磷酸緩衝溶液pH 值(3~5)時， 其滯留順序與有效電荷順序ㄧ致，得知AMP 並無特殊滯留，故本研究 進而以tri-O-acetyladenosine 為分子模版，在10 mM、pH 8 之磷酸緩衝 溶液AMP 有明顯滯留，但同為嘌呤類鹼基之GMP 其滯留力較弱，其最 II 佳分離條件pH 8、10 mM 之磷酸緩衝溶液，分離電壓為-25 kV，相同管 柱連續注入4 次其滯留時間RSD 值< 3.5 %，平均理論板數5039 m-1。 利用上述所建立系統為探討其複雜基質樣品的可行性，本研究選用主要 成份為多醣體並含少量核苷酸鹼基及核苷的市售靈芝膠囊作分析，以 9-ethyladenine 為分子模版所製備管柱，在硼酸緩衝溶液(10 mM, pH 9) 電壓15 kV 的環境下，成功的分離靈芝內的uracil、uridine 與adenosine， 其滯留順序為uracil > uridine > adenosine。