利用共聚焦掃描顯微鏡研究螢光分子在溶液中的動力學現象

Abstract

結合了共聚焦掃描顯微術、螢光相關光譜(Fluorescence correlation spectroscopy)技術，與電腦處理速度的進步，螢光相關光譜的技術應用在物理、化學、與生物領域上愈來愈頻繁。本篇論文主要是結合了共聚焦掃描顯微術與螢光相關光譜技術，觀察螢光奈米鑽石粒子與岩藻糖水解酶和抑制劑間的動力學現象。實現發現螢光奈米鑽石粒子而隨著觀察時間的增加，螢光強度也隨著增強，而擴散時間也變長與螢光奈米鑽石粒子在長時間下會有聚集(aggregation)的現象相符合。岩藻糖水解酶與抑制劑間的研究中，我們量測出當抑制劑還沒有與岩藻糖水解酶結合時，抑制劑的擴散係數(diffusion coefficient)為205.3±8.2 ，當岩藻糖水解酶與抑制劑結合時擴散係數變為86.0±2.0 ，這是由於岩藻糖水解酶的分子量(52000Da)與抑制劑的分子量(829.339)有明顯的差距，所以擴散係數有明顯的改變。另外我們也嘗試求得岩藻糖水解酶與抑制劑間的作用力，在25℃下測量出當岩藻糖水解酶的濃度在5nM、25nM、50nM下其解離平衡常數為(8.89±1.58)E-9、(9.49±2.14)E-9、(1.99±0.36)E-8，與抑制劑和岩藻糖水解酶有高結合力的現象符合。