Please use this identifier to cite or link to this item:
http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/24795
Title: | 文心蘭與香蕉乙烯受體基因之相關研究 Studies on Ethylene Receptor Genes from Oncidium Gower Ramsey and Banana |
Authors: | Wei-Fen Huang 黃暐芬 |
Advisor: | 杜宜殷 |
Co-Advisor: | 黃鵬林 |
Keyword: | 乙烯受體,啟動子,顯性負突變,1-MCP, ethylene receptor,promoter,dominant negative mutation,1-MCP, |
Publication Year : | 2008 |
Degree: | 博士 |
Abstract: | 文心蘭乙烯受體同源基因OgERS1 (AF276233) 之胺基酸序列,與其他單子葉植物所選殖出的乙烯受體序列極為相近。OgERS1在不同器官及去花藥蓋處理有不同的表現情形。在花苞中,OgERS1基因表現受到乙烯誘導,在1小時後大量表現,隨著乙烯施加時間增加而逐漸減少。在完全開放的小花中,乙烯處理0.5小時後,表現量可受到誘導而大量增加,而第二個表現高峰,則在乙烯處理36小時後可偵測得到。此外,在外加乙烯處理中,OgERS1會受到去花藥蓋處理的調控,降低整體表現量。
分析2.2 kb的OgERS1基因啟動子區域得知,許多反應元件 (responsive element) 存在於此啟動子中,例如乙烯反應元件 (ATTTCAAA)。經由OgERS1基因啟動子啟動GUS報導基因的分析結果顯示,該啟動子具有組織特異性,可專一性表現於阿拉伯芥的分生組織、花苞、側芽、花莖及離層區域。在荷爾蒙誘導性方面,GUS活性會受到外加24小時1及10 mLL−1乙烯的誘導,但離層酸卻會抑制OgERS1基因啟動子的活性。在逆境測試中,GUS活性會受到熱、創傷、高鹽、乾旱及淹水等處理的抑制。然而,該啟動子卻會受到葡萄糖、乳糖及麥芽糖的誘導,因此推測OgERS1與醣類之間具有交互作用。由上述結果顯示,OgERS1基因啟動子的表現情形,可受到生長及環境的共同調節。 在香蕉乙烯受體基因MhBER2啟動子的研究方面,已構築三種不同長度的啟動子區域,並接上報導基因GUS,轉殖至阿拉伯芥與菸草中。其中,含第一個隱子 (intron) 的B0E構築,會表現於轉殖植物的子葉、分生組織、側芽分枝處、葉、花莖、花器、年輕果莢及果莢的離層區域。在外加荷爾蒙處理中,MhBER2基因啟動子會受到乙烯、IAA及GA的誘導,並受到ABA的抑制。此外,MhBER2基因啟動子也會受到氯化鈣、高鹽、乾旱及熱等處理的誘導。由於不含第一個隱子的B1E及B3E等構築之轉殖植物中,幾乎沒有GUS活性表現,因此推測MhBER2基因的第一隱子,可促進MhBER2啟動子之活性。 為了減緩乙烯對文心蘭花瓣造成的老化現象,將OgERS1基因進行三種不同胺基酸的顯性負突變,包括Ile62→Phe62、Cys65→Tyr65及Pro36→Leu36等,經轉殖到阿拉伯芥及菸草中,測試各文心蘭乙烯受體突變基因對於乙烯的敏感度。然而,經由ACC測試結果顯示,乙烯三相反應 (triple response) 仍然存在於各突變轉殖體及過量表現的轉殖株中。因此,儘管OgERS1與其他雙子葉植物的乙烯受體基因序列相似度高達60%以上,其功能上可能仍具有歧異度。 為了解切花老化、外加乙烯及外加乙烯作用抑制劑1-MCP 對文心蘭小花蛋白質表現之影響,以二維蛋白質電泳進行分析。在外加乙烯處理中,並沒有觀察到明顯的單一蛋白變化量;而在外加1-MCP 處理中,可觀察到數個表現量具有變化的蛋白呈色點。經由ESI-MS/MS分析結果顯示,大部分都是蘭花病毒的蛋白質,且其表現量會隨著花朵老化而逐漸增加。此外,經由處理1-MCP後之文心蘭小花北方雜交結果得知,乙烯訊息傳導相關基因 OgERS1 及OgEIL2之轉錄可能受到同一機制調控;而OgEIL1基因則可能受到不同機制之調控。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/24795 |
Fulltext Rights: | 未授權 |
Appears in Collections: | 園藝暨景觀學系 |
Files in This Item:
File | Size | Format | |
---|---|---|---|
ntu-97-1.pdf Restricted Access | 6.43 MB | Adobe PDF |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.