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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/82344
標題: | 紙流道應用於種豬基因型鑑定之整合性核酸檢測套件 Integrated Nucleic Acid Detection Kit on Paperfluidics for Genotyping of Breeding Pigs |
作者: | Yun-Jing Xie 謝昀靜 |
指導教授: | 楊鏡堂(Jing-Tang Yang) |
關鍵字: | 紙基底擴增,紙基底萃取,技術整合,側層流檢測,核酸檢測, amplification,extraction,paperfluidics,lateral flow strip,nucleic acid detection,integrated device, |
出版年 : | 2021 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 本研究主旨為開發具備完整樣品處理能力的整合性核酸檢測套件,將DNA萃取、目標基因片段擴增與奈米金探針檢測等多步驟整合於紙流道檢測裝置,減少檢驗過程對儀器設備的依賴並降低塑膠製品的使用量,應用方面則以種豬基因型篩檢為標的。檢測裝置以友善使用為設計目標,利用紙基底簡易過濾樣品雜質,提高核酸純度,並與事先乾燥的擴增試劑及引子相互反應,減少人為操作裝置之需求,而整套紙基底檢測平台皆封裝於膠膜中以降低試劑蒸發,提供方便、快速且低成本之核酸檢測裝置。 本研究透過酸鹼指示劑將酸鹼中和反應過程的流場可視化,本研究發現兩不同溶液在紙流道上的相互反應只會出現在兩液交界面,無法充分混合,而鄰近紙張邊緣的流體流速相對紙張中央的流體流速慢,改變紙張幾何對流場變化無明顯影響。將紙基底平台利用實際樣品進行生物實驗時,對於血樣的製備本研究僅在血液中添加RBC緩衝液用以打破血球與稀釋濃稠血液,由此配方執行纖維素紙基底萃取後之萃取產物雜質較多,但並不會抑制擴增反應,而在擴增區則是利用定點式的擴增方法在玻璃纖維紙材中進行RPA恆溫擴增,檢測區結合市售HybriDetect — Universal Lateral Flow Assay Kit實現可視化結果判讀,由各單一功能紙基底元件整合成紙流道檢測系統,將整體裝置包含萃取區、擴增區以及檢測區緊密包覆於護貝膜中避免水份蒸發與外在環境汙染,最後檢測結果基於單一核苷酸差異的引子專一性不足,無法進行有效篩檢,然而已驗證本裝置可由未經處理的血樣,藉由紙流道系統處理樣品中核酸的萃取及擴增,並於50分鐘內獲得肉眼可辨別的擴增訊號。 於未來期盼使裝置的適用性更為廣泛,包括透過更多的臨床樣品驗證裝置的準確度與穩定性,並可應用在更多種來源的樣品檢測,為即時診斷概念應用於核酸檢測中盡一份心力。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/82344 |
DOI: | 10.6342/NTU202101637 |
全文授權: | 同意授權(全球公開) |
電子全文公開日期: | 2023-07-30 |
顯示於系所單位: | 機械工程學系 |
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