MiR-192/194的缺失如何影響飲食誘導的脂肪肝

Abstract

肥胖誘導的脂肪肝是非酒精性脂肪肝的一種，是由於肝細胞對於脂質代謝異常與脂肪滴堆積的結果。短期的脂肪肝堆積其實是可逆的，只要做好飲食控制與適當運動都可以治癒。然而，當脂肪肝變成慢性且反覆發炎與纖維化，就會導致肝臟受損，過度嚴重時，無法有效治療。 研究顯示在肝臟中miR-192和miR-194高度表現而且和肝的疾病有密切關係。然而，miR-192/194缺失是否導致肝代謝異常仍有待研究，所以本研究的目標是探討miR-192/194的缺失如何影響飲食所導致的脂肪肝。 首先，我們分析餵食正常飼料的miR-192/194缺失組(後稱突變組)，發現與控制組相比，不論在肝臟的型態、血清各項生化指標均相差無幾。接著，我們以高脂飼料餵食六週大(簡稱年輕組)和三個月大(簡稱成年組)的小鼠。每一週測量體重變化，並於第12週犧牲動物，並收取血清做總膽固醇、血糖與三酸甘油脂肪酸的測量、肝組織做蛋白質與RNA表現量測試和H E染色和Trichrome染色。 在餵食12週高脂飼料後，年輕控制組的體重是明顯比年輕突變組高。形態學上的觀察可以發現，不論是年輕組或成年組中，突變組的小鼠肝臟脂肪滴堆積與纖維化比控制組少。血清生化分析結果也可以得知在成年突變組小鼠中，總膽固醇也顯著低於控制組。更進一步分析基因表現量，利用q-PCR與西方墨點法可以得知PPARα、PPARγ、PGC1α和PGC1β在突變組的小鼠中表現量高於控制組。文獻上已知這些基因的上調可以增加肝臟分解脂質與避免形成脂肪堆積。為證實miR-192/194是否直接調控PGC1α，我們利用轉染的方式上調或抑制AML12細胞中的miR-192/194。結果發現PGC1α以及其他PPAR 訊息傳遞的基因均為miR-194所抑制，而非miR-192。 同時，miR-194的過度表現會導致細胞在棕櫚酸的誘導後產生較多的脂肪。最後，我們利用冷光酶報告蛋白確認了miR-194可直接抑制帶有PGC1α 3’-UTR的質體表現。且此抑制的效果在突變miR-194結合位點後消失。綜上，我們確認miR-194可直接調控PGC1α。 總結來說，我們認為miR-192/194的缺失會保護肝臟免於飲食所誘導的脂肪肝，且可能是透過上調PGC1α以及其他PPAR 訊息傳遞來控制。後續會需要再做更多實驗來證實miR-192/194對於非酒精性脂肪肝的潛在治療性。