確定MSI-1和hnRNP L以及DDX47是否調控線蟲類幹細胞接縫細胞的分化

Abstract

微小核醣核酸(MicroRNAs)是一段長約22個核甘酸的非編碼RNA，其作用方式為透過miRISC complex結合上目標mRNA的3′端不轉譯區，抑制目標基因的轉譯或是使目標基因降解。其中，let-7為最早被發現的miRNA之一，在線蟲中負責調控第四幼蟲期至成蟲的過渡階段，低量的let-7表現會無法有效抑制下游目標lin-41，而造成線蟲的上皮接縫細胞(hypodermal seam cell)終端分化遲緩以及外陰(vulva)發育異常。具let-7點突變之線蟲let-7(n2853)在第四幼蟲期的末期會發生上皮接縫細胞異常多分裂一次以及外陰爆裂的性狀。而在不同物種間皆發現有let-7與lin-41的路徑，顯示這是一個具演化保守性的發育調節機制，且let-7的缺失已被發現與許多癌症相關。為了找出可能參與let-7生合成或功能有關之異質核糖核蛋白(hnRNPs)或DEAD-box核糖核酸解旋酶蛋白，實驗室先前已利用RNAi篩選出MSI-1、DDX-47以及hnRNP L幾個候選蛋白，但在我們進一步實驗以後，發現MSI-1以及DDX-47可能不參與在let-7路徑。降低DDX-47僅會延遲線蟲生長並不會降低上皮接縫細胞的數目，而降低hnRNP L表現可以降低n2853線蟲的上皮接縫細胞數，且不會抑制線蟲的生長。利用GFP後接lin-41 3′ UTR以及mCherry後接unc-54 3′ UTR的雙色螢光報告基因之線蟲探討hnRNP L與let-7關係，發現降低hnRNP L不只不會下降雙色螢光報告基因線蟲lin-41 3′ UTR的GFP，反而上升。同時，原本預期不會影響有剔除let-7結合位點之雙色螢光報告基因線蟲的lin-41 3′ UTR，結果也看到GFP上升，而我們北方墨點法以及即時聚合酶連鎖反應的結果皆顯示降低hnRNP L並不會影響mature let-7的生成量，綜合以上這些結果，顯示降低hnRNP L可能不只會影響到let-7一個路徑，而是會透過影響其他相關路徑，進而影響到線蟲lin-41表現以及上皮接縫細胞的發育，至於hnRNP L會如何影響lin-41的表現以及與let-7下游lin-29之間的關係，仍有待未來進一步的探討。