應用適體感測黏蛋白-1 SEA單元之最佳化研究

Abstract

"黏蛋白-1(mucin-1；MUC1)是人類癌症研究的重要生物標記，在常見癌症，如肺腺癌、乳癌等都會有過度表現的狀況。在臨床上以MUC1 SEA單元作為標靶治療，若能快速且精準的偵測此單元，將能對癌症的早期診斷有偌大的益處。近年來發展適體感測器用於即時檢測MUC1，其具備高靈敏度及與MUC1高結合力等優勢。為了達成高效感測的目標，除了提升適體的效能、優化感測條件外，並且可以使用抗體輔助來提升適體感測器之性能。針對實驗室已篩選出MUC1 SEA單元(從未有篩選過)的K2適體進行優化與感測應用。首先，透過表面電漿共振分析證明K2適體與MUC1 SEA單元有專一性的結合，接著使用熔解曲線分析對K2適體的結構進行穩定性分析，透過溫度和離子強度的調整，找到最適的結合條件為2 mM MgCl2 及100 mM NaCl應用於電化學適體感測器分析，而且發現K2適體和抗體各別與MUC1 SEA單元有不同的結合位點。整合K2適體的最適化條件且與抗體結合MUC1 SEA單元的位點不同，將其應用於抗體輔助電化學適體感測器檢測MUC1 SEA單元，使用電化學阻抗頻譜進行感測。實驗結果顯示在只有K2適體的電化學適體感測器中，檢測MUC1 SEA單元的濃度線性區間在29.6至66.6 nM之間且檢測極限在8.59 nM，此感測器計算得到的KD,app值為77.6 nM，R2為0.904。另外，透過使用抗體輔助電化學感測器測量到MUC1 SEA單元的濃度線性區間為1.23至11.1 nM且檢測極限為0.48 nM，此感測器計算得到的KD,app值為33.8 nM，R2為0.977，綜合兩種感測器的數據結果比較，以抗體輔助電化學適體感測器顯著地提升檢測濃度範圍及偵測極限，也證明其對MUC1 SEA 單元作為標靶檢測具有潛力。"