Mef2c的磷酸化在FL調控的漿狀樹突細胞發育中所扮演的角色

Abstract

樹突細胞是連結先天性和適應性免疫系統的重要抗原呈現細胞，樹突細胞可以分化成傳統型樹突細胞(cDC)和漿狀樹突細胞(pDC)，其表面有不同的抗原並擁有不同的生理功能。然而，對於cDC和pDC的轉錄調控大部分仍未清楚。我們先前的研究指出Mef2c的表現在pDC高於cDC，且條件基因剔除Mef2c會使pDC發育受損。Flt3配體已知對於樹突細胞的發育調控是重要的。然而，Flt3訊息傳遞路徑以及磷酸化酶級聯如何調控Mef2c的活性仍不清楚。在此，我們的結果顯示在脾臟內的樹突細胞表現六號同功型Mef2c。我們用含有Mef2c結合位的klf2和α-catenin 螢光素酶報導質體來研究Flt3訊息傳遞路徑的下游是如何調控Mef2c的活性。當過度表達Flt3受體和Mef2c時，螢光速酶活性會隨著FL配體的加入而增加。此外，p38和ERK5已知會磷酸化Mef2c，在Ba/F3細胞株過度表達p38和ERK5會使螢光速酶活性上升，並隨著FL配體的刺激而有更顯著地增加。除此之外，加入p38抑制物可以降低螢光素酶的活性，顯示p38可能為Flt3訊息傳遞路徑下游中可以調節Mef2c活性的主要磷酸化酶。Mef2c的T293、T300、S387位點已知會被p38或ERK5磷酸化，在293T或Ba/F3中，磷酸模擬(S/TE/D)或磷酸失活(S/TA)突變並不會改變顯著地改變Mef2c活性。我們也找到另一個在S3962的磷酸化位點，其並不受p38所調控，不過這個位點在樹突細胞發育之中所扮演的角色仍然不清楚。Mef2c不足在永生化的造血前驅及幹細胞株中，會導致runx2和tcf4調控pDC發育重要的基因表現量下降。利用含Mef2c結合位的runx2增強子的螢光速酶活性分析實驗說明FL訊息傳遞路徑也會透過調控Mef2c活性來調控runx2的表現。統整上述結果，Flt3訊號可透過p38磷酸酶上調Mef2c活性進而調控runx2來控制pDC的發育。此外，我們也用Mef2c多肽鏈作為致免疫物並生產出高親和力的大鼠多株抗體，提供高靈敏度的工具以偵測某些細胞中低表現量的Mef2c。