在活體外細胞培養系統中針對NR4A/PD-1訊號途徑調控T細胞耗竭

Abstract

在慢性發炎和癌症中往往發現T細胞存在有效功能低下和抑制性受體表現量上升的狀態，稱為T細胞耗竭。由活體內系統生產耗竭性T細胞耗時且只能產生有限數量，因此活體外系統在近年逐漸被建立和驗證來克服使用活體內系統的缺點。我們成功建立一個為期五天的活體外系統用以產生似耗竭性小鼠CD8 T細胞。在此系統下藉由電穿孔送入小分子干擾核糖核酸進行基因敲落，達到調查該目標基因是否參與T細胞耗竭的目的。例如，我們發現三重敲落NR4A家族會部分回復細胞激素的產生。雖然並無在耗竭性T細胞中發現PD-1受到NR4A敲落的影響，但是在我們建立的EL4細胞模型中，由慢病毒轉染方式將小髮夾核糖核酸送入細胞來敲落NR4A1/3，結果發現佛波酯/離子黴素刺激後PD-1的表達不會上升。此外，我們也嘗試使用小分子藥物來測試是否有效預防T細胞耗竭。我們使用柏萊膜衣錠 (Dasatinib)，一種SRC激酶 (kinase) 抑制劑，發現能夠有效防止T細胞耗竭，同時NR4A家族的表達會受到抑制。進一步藉由質譜流式細胞技術 (CyTOF) 和全核糖核酸測序分析發現柏萊膜衣錠處理過的耗竭性T細胞與效應T細胞基因表徵特徵大部分一致。