為初代人類自然殺手細胞建立CRISPR 基因編輯平台

Abstract

自然殺手細胞是在癌症免疫治療中非常有潛力的先天性免疫細胞。為了研究和增強自然殺手細胞的功能，強大且完整的基因編輯工具是必須的。但是，自然殺手細胞對於傳統的基因編輯方式例如質體轉染和病毒轉導都是很困難的，所以為了克服這些限制，我在這篇論文中為了自然殺手細胞建立一個強大的CRISPR基因編輯的平台並且是利用電轉染組裝好之Cas9: guide RNA核蛋白送入細胞並進行基因剔除。為了要送入大片段的轉殖基因到自然殺手細胞中，我們選擇了擁有不會嵌入宿主基因體和大轉殖基因乘載量(38kb)的桿狀病毒，這能讓我們送入許多不同的基因。然而我們發現野生型的桿狀病毒病無法感染自然殺手細胞。在這篇論文當中，我觀察並編輯了自然殺手細胞表面受體使其能被野生型的桿狀病毒感染，我也利用了細胞內先天免疫反應的抑制藥物，希望能避免桿狀病毒感染細胞後產生的免疫反應。這篇論文當中的發現提供了桿狀病毒感染自然殺手細胞後重要的現象，也為未來以桿狀病毒為基礎的自然殺手細胞基因編輯平台奠定了重要的基礎。