鯔魚卵黃前質及性類固醇結合蛋白之特性分析

Abstract

雌性卵生脊椎動物進入生殖週期之初期，在雌二醇誘導下，肝細胞進行卵黃前質合成，經由血液運送至卵巢，以胞飲作用進入卵細胞中，進一步分解為磷卵黃（phosvitin）及脂卵黃（ lipovitellin)，為堆積於卵細胞中之主要卵黃蛋白，此生理現象為卵細胞成熟之重要特徵。本論文擬就血液雌二醇結合蛋白、卵黃前質鑑定及特性、以及雌二醇誘導卵黃前質生成作用等進行研究，期能針對與卵黃生成作用相關生理獲得更進一步之瞭解。 以 HPLC-陰離子交換管柱層析分析方法，比較雌二醇注射處理性未成熟烏魚血清、雄魚血清與成熟中雌魚血清，鑑定雌性特有、雌二醇誘發之強陰電性蛋白質吸收峰，並比較此吸收峰與卵黃蛋白萃取液之胺基酸組成及免疫性質，確認其為卵黃前質蛋白。以 7% Native-PAGE 配合以各種特性染色分析，確定卵黃前質具有醣蛋白、脂蛋白及磷酸化特性，且其蛋白質相當不穩定。經由 10% SDS-PAGE 分析，可知卵黃前質蛋白主要由五條太鏈所組成，其大小均接近於 116kd。 以不同劑量之雌二醇注射處理性未成熟魚，約可誘導卵黃前質生成；，則血清中卵黃前質最高含量之升高與注射劑量呈相關性。以 12.5 ug/g 體重雌二醇劑量注射尚未進入生殖季之成魚，其血清中之卵黃前質含量在第十天可達 121.73 士 33.73 mg/ml，遠高於生殖季內成熟烏魚採樣測值（0-2.6 mg/ml), 其可能原因為卵黃前質在非生殖季中無法進入卵細胞，而造成高量蓄積於血液中，或因雌二醇注射劑量高於一般之生理值，而造成之藥理現象。 烏魚血清中，證實有與雌二醇具專一性結合能力蛋白之存在。以不同之類固醇進行競爭性結合，發現其與一般性類固醇結合力高，但與助孕素之結合能力不佳；經以 HPLC-陰離子交換管柱分離雌二醇結合蛋白並進行 7 % Native-PAGE 分析，發現雌二醇放射性集中於 Rf 值 0.43 處，但可能因蛋白質含量過低，而未能對應於一電泳染色帶。