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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/75626
標題: | 酵母菌Topoisomerase II單源抗體之製備 Preqaration of Monoclonl Antibodies Against Yeast Topoisomerase |
作者: | Cheng-Chung Hsu 許正忠 |
出版年 : | 1986 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 摘要 本實驗中利用重組DNA的表現,得到相當量的混交蛋白質(hybrid protein)。其胺基端是Topoisomerase II,羧基端是β-galactosidase。利用Sephacry1-S-300膠質過濾管柱以及APTG-親和性管柱之純化,得到一極純之蛋白質,並經由聚丙烯醯胺膠電泳法SDS-PAGE分析其多勝鏈之分子量為160kd。將此純化後之蛋白質免疫鼴鼠BALB/c三次,並進行融合瘤細胞之製備,得到6個早抗原陽性反應之融合瘤細胞株。其中兩株經酵素連接免疫分析法分析為陽性反應較強者,乃進行單源抗體之大量製備。製備出的單源抗體,經純化後分析其亞型,再用酵素連接免疫沾染法(Western blot)證實此兩細胞株即2A3和1D5分泌之抗體乃特定於Topoisomerase II之單源抗體。此外,我們為了進一步瞭解,這兩株單源抗體和Topoisomerase II活性的關係。我們進行酵素活性分析實驗,結果顯示2A3和1D5對於Topoisomerase II活性有抑制的作用,此乃確信2A3和1D5確為Topoisomerase II之單源抗體細胞株。 ABSTRACT Sufficient quantites of a fusing protein TOP 2-β-Galactosidase has been prepared by expressing the recombinant DNA in E. coli. The recovery procedures include ammonium sulfate fractionation, molecular sieving (sephacryl S-300) chromatography and APTG-agarose affinity chromatography. The purified protein has a MW of 160 kd in SDS-PAGE. Monoclonal antibodies to the fusing polypeptide have been prepared. Two clones 2A3 (IgG1/k) and 1D5 (IgG2b/k) are specific to TOP 2. The activities of topoisomerase II from yeast are inhibited by both 2A3 and 1D5. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/75626 |
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