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| DC 欄位 | 值 | 語言 |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Cheng-Chung Hsu | en |
| dc.contributor.author | 許正忠 | zh_TW |
| dc.date.accessioned | 2021-07-01T08:14:16Z | - |
| dc.date.available | 2021-07-01T08:14:16Z | - |
| dc.date.issued | 1986 | |
| dc.identifier.citation | 參考文獻 1. Wang, J.C. 1971, J. Mol. Biol. 55:523-33. 2. Cairns, J. 1963, J. Mol. Biol. 6:208-13. 3. Richardson, J.P. 1975, J. Mol. Biol. 91:477-87. 4. Wang, J.C. 1974, J. Mol. Biol. 87:797-816. 5. Nelson, E.M. et. al. 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:1316-65. 6. Tewey, K.M. et. al. 1984, J. Biol. Chem. 259:9182-9187. 7. Tewey, K.M. et. al. 1984, Science 226:464-468. 8. Chen, G.L. et. al. 1984, J. Mol. Biol. 259:13560-13566. 9. Yaw-Huei Hsiang et. al. 1985, J. Biol. Chem. 260: 14 873-14878. 10. Milstein C. et. al. 1977, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 41:793-803. 11. Tadaatsu Goto, James, C. Wang 1984, J. Biol. Chem. 259:10422-10429. 12. Smith, D.H. et. al. 1967, J. Bacteriol. 93;71-79. 13. Drlica, K; et. al. 1978, J. Mol. Biol. 120:145-54. 14. Hsieh, T.S. et. al. 1980, Cell 21:115-125. 15. T. Maniatis et. al. 1982, “Molecular Cloning” pp. 368-369. 16. Laemmli, U.K. 1970, Nature (London) 227:680-685. 17. Oliver, H. Lowry. et. al. 1951, J. Biol. Chem. 183: 265-275. 18. Jeffrey H. Miller. “Experiment in Molecular Genetics” 1972, PP. 398-404. 19. Angel L. DE Blas. 1983, Analytical Biochemistry 133: 214-219. 20. Fred Sherman 1974, “Method in Yeast Genetics” pp. 77-80. 21. Ide, G.J. and Sanders, C.A.1981, Curr. Genet. 4: 85-90. 22. Tadaatsu Goto and James C. Wang 1982, J. Biol. Chem. 257:5866-5872. 23. Agnes Ullmann 1984, Gene 29:2 7-31. 24. Muller-Hill et. al. 1974, Nature 249:561-563. 25. Ruther, U. et. al. 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 6852-6855. 26. Wilcken-Bergmann, B. et. al. 1983, EMBO J. 2:1271-1274. 27. Roy, A. et. al. 1983, EMBO J. 2:791-797. | |
| dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/75626 | - |
| dc.description.abstract | 摘要 本實驗中利用重組DNA的表現，得到相當量的混交蛋白質(hybrid protein)。其胺基端是Topoisomerase II，羧基端是β-galactosidase。利用Sephacry1-S-300膠質過濾管柱以及APTG-親和性管柱之純化，得到一極純之蛋白質，並經由聚丙烯醯胺膠電泳法SDS-PAGE分析其多勝鏈之分子量為160kd。將此純化後之蛋白質免疫鼴鼠BALB／c三次，並進行融合瘤細胞之製備，得到6個早抗原陽性反應之融合瘤細胞株。其中兩株經酵素連接免疫分析法分析為陽性反應較強者，乃進行單源抗體之大量製備。製備出的單源抗體，經純化後分析其亞型，再用酵素連接免疫沾染法(Western blot)證實此兩細胞株即2A3和1D5分泌之抗體乃特定於Topoisomerase II之單源抗體。此外，我們為了進一步瞭解，這兩株單源抗體和Topoisomerase II活性的關係。我們進行酵素活性分析實驗，結果顯示2A3和1D5對於Topoisomerase II活性有抑制的作用，此乃確信2A3和1D5確為Topoisomerase II之單源抗體細胞株。 | zh_TW |
| dc.description.abstract | ABSTRACT Sufficient quantites of a fusing protein TOP 2-β-Galactosidase has been prepared by expressing the recombinant DNA in E. coli. The recovery procedures include ammonium sulfate fractionation, molecular sieving (sephacryl S-300) chromatography and APTG-agarose affinity chromatography. The purified protein has a MW of 160 kd in SDS-PAGE. Monoclonal antibodies to the fusing polypeptide have been prepared. Two clones 2A3 (IgG1/k) and 1D5 (IgG2b/k) are specific to TOP 2. The activities of topoisomerase II from yeast are inhibited by both 2A3 and 1D5. | en |
| dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-07-01T08:14:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1986 | en |
| dc.description.tableofcontents | 目錄 一、摘要：(Abstract) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . l 二、緒言：（Introduction）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2 三、A實驗流程圖：(Flow Chart）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4 B材料與方法：(Material and Method）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 材料：(Material ）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 1.菌種. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 2.質體（plasmid) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 3.MacConkey Plate. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 4.細菌培養液. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 5. 細胞培養液. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 6.骨髓瘤及融合瘤細胞株培養液. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 7.細胞株. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 8.HAT-medium之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 9.PEG-1500溶液之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 10.HT-medium之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 11.膠質過濾管柱之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 11.親和性管柱之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 l3.流洗管柱之緩衝液. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6 14.β-Galactosidase活性分析用緩衝液. . . . . . . . . . .. . 7 15.實驗動物. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 7 16.試劑. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7 l7.器材. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 方法：(Method）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 1.Competent cell之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 2.Transformation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 3.MacConkey plate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 4.Minipreparation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 5.細菌培養方法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 6.抽取蛋白質. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 7.硫酸銨之沈澱. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 8.膠質過濾管柱分離蛋白質. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 9.蛋白質溶液之濃縮. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 l0.親和性吸附管柱純化蛋白質. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 11.電泳分析. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 12.膠片之染色方法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 13.蛋白質濃度之定量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 l4.酵素活性分析法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 15.BALB/C的免疫. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 16.融和瘤之製備. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 17.酵素連接免疫吸附分析法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 l8.融合瘤細胞之單株化. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 19.單源抗體之製備及純化. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13 20.單源抗體亞型之測定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 21.酵素連接免疫沾染技術（Western blot）. . . . .. . . . . . . . 14 22.酵母菌中細胞液之抽取. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15 23.Topoisomerase II活性之分析. . . . . . . . . . . . . . . . . 15 24.單源抗體對於Toposomerase II活性抑制作用之分析. . . 15 附錄(一)聚丙烯醯胺膠之製備SDS-PAGE . . . . . . . . . . . . .. 16 附錄(二)樣品緩衝液、染色液及顯色液之配製. . . . . . . . . . . . . 17 附錄(三)硝酸銀染色液及顯色液之配製. . . . . . . . . . . . . . . . . 18 附錄(四)利用Lowry法測定蛋白質濃度. . . . . . . . . . . . . . . . . 19 附錄(五)ELISA中受質溶液配法. . . . . . . . . . . . . . . . . 20 附錄(六)標準分析溶液、培養基、細胞等張液之配製. . . . . . . . 20 附錄(七)酵素連接免疫沾染技術用緩衝液. . . . . . . . . . . . . . 21 四、結果. . . . . . . . . . . . . . . . . 22 五、討論. . . . . . . . . . . . . . . . . 26 六、參考文獻. . . . . . . . . . . . . . . . . 40 | |
| dc.language.iso | zh-TW | |
| dc.title | 酵母菌Topoisomerase II單源抗體之製備 | zh_TW |
| dc.title | Preqaration of Monoclonl Antibodies Against Yeast Topoisomerase | en |
| dc.date.schoolyear | 75-2 | |
| dc.description.degree | 碩士 | |
| dc.relation.page | 48 | |
| dc.rights.note | 未授權 | |
| dc.contributor.author-dept | 生命科學院 | zh_TW |
| dc.contributor.author-dept | 生化科學研究所 | zh_TW |
| 顯示於系所單位： | 生化科學研究所 | |
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