以螢光劑探討β-雨傘節毒素之結構

Abstract

台灣雨傘節(Bungarus multicintus)毒液中之β-Bungarotoxin是由兩條多勝鏈(A鏈、B鏈)以雙硫鍵連接而成，分子量約20000，經由CM-Sephadex C-25、Sephadex G-50分離，純化後可用2-mercaptoethanol將A、B鏈拆開，而在SDS-PAGE gel中把A、B鏈分離，再以diffusion Blotting把A、B鏈transfer到Nitrocellulose paper 上，此法將可用來篩選Anti-A和Anti-B的抗體。 ANS可以與β-Bungarotoxin結合，其結合強度經利用ANS螢光強度變化推算，在無兩價陽離子時為(4.45 ± 0.55)×10^(4)M^(－1)，在Ca+2或 Sr+2存在下時分別為(3.25±0.95)×10^(4)M^(－1), (2.93±0.08)×10^(4)M ^(－1)。由此可以推斷Ca+2或Sr+2與β-Bungarotoxin結合後可引起其conformation的改變，並且具有穩定的作用。 β-Bungarotoxin用5-iodoacetamidofluorescein加以修飾以標示A-chain上之兩個Met，初步結果合於期望，將可提供進一步研究β-Bungarotoxin conformation的途徑。