請用此 Handle URI 來引用此文件：
http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/75486完整後設資料紀錄
| DC 欄位 | 值 | 語言 |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Juan Chung-Ching | en |
| dc.contributor.author | 阮忠清 | zh_TW |
| dc.date.accessioned | 2021-07-01T08:13:27Z | - |
| dc.date.available | 2021-07-01T08:13:27Z | - |
| dc.date.issued | 1983 | |
| dc.identifier.citation | 1. Lee, C. Y., Chang, C. C. et al. (1968) Naunyn-Schmiedebergs Arch. Pharmacol., 259, 360-374. 2. Meldrum, B. S. (1963) J. Physiol. (Lond.), 168, 49-50. 3. Izord, Y. et al. (1969) C. R. Acad. Sci. (Paris), 269, 96-97. 4. Larsen, P. R., Wolff, J. (1968) J. Biol. Chem., 243, 1283-1289. 5. Braganca, B. M., Patel, N. T. (1967) Biochim. Biophys. Acta, 136, 508-520. 6. Condrea, E. (1974) Experientia, 30, 121-129. 7. Lee, C. Y. (1972) Ann. Rev. Pharmacol., 12, 265-286. 8. Condrea, E., De Vries A. and Mager, J. (1964) Biochim. Biophys. Acta, 84, 60-73. 9. Gabriel, O. (1971) in Methods Enzymol. Vol.22, 565-577. 10. Fairbanks, G., Steck, T. L. & Wallach, O. F. H. (1971) Biochemistry, 10, 2606-2617. 11. Dodge, J. T., Mitchell, C. and Hanahan, D. J. (1963) Arch. Biochem. Biophys., 100, 119-130. 12. Hung, M. C. and Chen, Y. H. (1977) Int. J. Peptide Protein Res., 10, 277-285. 13. Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A. L. and Randall, R. J. (1951) J. Biol. Chem., 193, 265-275. 14. Resch, K., Imm, W., Ferber, E., Wallach, D. F. H. and Fischer, H. (1971) Naturwissenschaften, 15. Warren, L. (1959) J. Biol. Chem., 234, 1971-1975. 16. Gross, E. and Witkop, B. (1962) J. Biol. Chem., 237, 1856-1860. 17. Spackman, D. H., Stein, W. H. and More, S. (1958) Anal. Chem., 30, 1190- 18. Shechter, Y., Burstein, Y. and Patchornik, A. (1975) Biochemistry, 14, 4497-4503. 19. Markwell, M. A. K. and Fox, C. F. (1978) Biochemistry, 22, 4408-4817. 20. Sullivan, K. H. and Williams, R. P. (1982) Anal. Biochem., 120, 254-259. 21. Steck, T. L., Ramos, B. and Strapazon, E. (1976) Biochemistry, 15, 1154-1161. 22. DuPRE, A. M. and Rothstein, A. (1981) Biochim. Biophys. Acta, 646, 471-478. 23. Seaman, G. V. F., Knox, R. J., Nordt, F. J. and Regan, D. H. (1977) Blood, 50, 1001-1011. 24. Brown, S. S. and Spudich, J. A. (1981) J. Cell Biol. 88, 487-491. 25. Lin, S., Santi, D. V. and Spudich, J. A. (1974) J. Biol. Chem., 249, 2268-2274. 26. Maniatis, et al. (1982) Molecular cloning, A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, pp. 436-437. 27. Steck, T. L. and Yu, J. (1973) J. Supramol. Struct. 1, 220-232. 28. Yu, J., Fischman, D. A. and Steck, T. L. (1973) J. Supramol. Struct., 1, 233-248. 29. Dawson, R. M. C., Hemington, N. and Lindsay, D. B. (1960) Biochem. J., 77, 226-230. 30. Daniel, E. and Weber, G. (1966) Biochemistry, 5, 1893-1899. 31. Schatchard, G. (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci., 51, 660-672. 32. Chen, Y. H., Hu, C. J., Lee, C. P. and Liou, R. F. (1983) in Frontier in Biochemical and Biophysical Studies of Proteins and Nucleic Acids: Foundamental of DNA Engineering, published by Elsevier Science publishing Co., Inc. (in press). 33. Munson, P. J. and Rodbard, D. (1980) Anal. Biochem., 107, 220-239. 34. Klotz, I. M. (1982) Science, 217, 1247-1249. 35. Chen, Y. H., Hung, M. C., Chang, K. L. and Lai, M. Z. (1977) J. Chinese Biochem. Soci., 6, 27-36. 36. Chen, Y. H., Lai, M. Z. and Kao, L. S. (1981) Biochem. International, 3, 385-390. 37. Lin, D. C. & Lin, S. (1978) J. Biol. Chem., 253, 1415-1419. 38. Sheetz, M. P. and Singer, S. J. (1977) J. Cell. Biol., 73, 638-646. 39. Marchesi, V. T. (1979) Seminars in Hematology, Vol.16, No. 1, pp.3-20. 40. Marchesi, V. T., Furthmayr, H., Tomita, M. (1976) Ann. Rev. Biochem., 45, 667-698. 41. Chang, C. C. (1979) Hand. Exp. Pharmacol., 52, 309-376. 42. Palek, J., Liu, S. C. and Synder, L. M. (1978) Blood, 51, 385-395. 43. Condrea, E. (1979) Hand. Exp. Pharmacol., 52, 448-479. | |
| dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/75486 | - |
| dc.description.abstract | ?了證明心臟毒蛋白(Cardiotoxin)作用於紅血球之部位，我們利用化學修飾法，將胺基酸序列中的第24及第26甲硫基丁氨酸(Methionine)很專一性的以溴化氰切去，發現此衍生物的生物活性幾乎完全消失，但免疫能力依舊存在。利用螢光光度計(Fluorescence spectrophotometer)研究此衍生物與ANS複合物的螢光特性而知發射光譜由原來的540nm波長移徙到480nm，這證明ANS與某一非極性基團結合所致，而此基團群可能就是毒蛋白的第22至第26氨基酸所構成的非極性環(nonpolar loop)，如果此種推論正確，則甲硫基丁氨酸被切除後，使特異的結合部位發生立體構造的改變，直接使生物活性降低，甚或消失。 同時，我們將血球細胞以α-chymotrypsin; N-Acetylneuraminidase及Cytochalasin B處理，用以切去一直被認?是離子通透細胞及醣類運轉通道的Band 3；除去細胞膜外主要負電荷來源的Sialic acid或阻絕Actin的結合部位以抑制Actin的聚合，再將處理的血球細胞與碘-125標示之心臟毒蛋白反應，進一步做結合分析(binding assay)，顯示出心臟毒蛋白與紅血球之結合不受該處理之影響。 以〔125I〕-CTX繼續研究心臟毒蛋白究竟結合於細胞膜的那一部位時，使碘－125標示之毒蛋白與血球懸浮液在37℃及15℃下反應15分鐘，再製備細胞膜，其次，以0.1N NaOH或0.5％ triton X-100個別抽取細胞膜，發現放射性碘－125全部存在無法抽取的殘留物中，與抽出液，殘留物的化學組成分析做一比較，我們可以確定碘－125毒蛋白的最終標的(target)可能是神經磷脂質(Sphingomyelin)，而有少部份在band 1, 2造成aggregate，此種凝聚的band 1, 2也無法被這兩種試劑抽取。 因?PBS (phosphate-buffered saline)係生物系統中細胞培養最廣用的緩衝溶液，我們因而比較它與實驗所用的plasma expander（代用血漿，商品名?Moriamin）之效果，發現血球在PBS內很快沉降，造成實驗上很大的困擾，此外，若血球與毒蛋白在37℃作用時，短時間內?令細胞溶血，無法形成Non-lytic period。凝膠電泳分離法，顯示出血球被毒蛋白作用後，band 3, 4.2, 5含量明顯下降，且易造成band 5和band 1, 2形成凝聚。 | zh_TW |
| dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-07-01T08:13:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1983 | en |
| dc.description.tableofcontents | 縮寫細表(LIST OF ABBREVIATIONS)……………………………………………………Ⅴ Ⅰ、摘要(SUMMARY)……………………………………………………1 Ⅱ、緒言(INTRODUCTION)……………………………………………………3 Ⅲ、試驗材料與方法 一、試驗材料(Experimental materials)……………………………………………………7 二、方法(Methods)……………………………………………………8 (一) 飯匙倩心臟毒蛋白的分離純化(Isolation and purification of cobra Cardiotoxin)……………9 (二) 心臟毒蛋白純質鑑定(Homogeneity of CTX)……………………………………………………9 (三) 血液的收集與洗滌(Collection and Washing of blood cells)………………………………………10 (四) 紅血球溶血作用的動力學機制(Kinetics of erythrocyte lysis)……………………………………10 (五) 紅血球ghost與心臟毒蛋白處理過之紅血球ghost之配製(Preparation of erythrocyte ghost and CTX pretreated erythrocyte)……………………………………………………11 (六) 蛋白質濃度之定量(Determination of protein Concentration)………………………………………12 (七) Sialicacid之定量(Sialic acid determination)……………………………………………………13 (八) 心臟毒蛋白之化學修飾(Chemical modification of CTX) Ⅰ、溴化氰切斷(Cleavaged by Cyanogen bromide)……………………………………………………14 Ⅱ、甲硫基丁氨酸的部份氧化(Partial oxidation of Methionine residues)………………………15 Ⅲ、心臟毒蛋白的碘化作用(Iodination of CTX)……………………………………………………15 (九) 心臟毒蛋白與紅血球細胞的結合分析（Binding assay of CTX to erythrocyte cells） (Ⅰ) 紅血球的處理(Treatment of RBC) A、Band 3以α－胰凝乳蛋白?分解(Digestion of band 3 with α－chymotrypsin)…………17 B、紅血球以N－乙醯基神經胺糖?處理(Digestion with N-acetylneuraminidase)……………17 C、ATP充足與ATP缺乏之紅血球配製(Preparation of ATP-enriched and ATP-depleted RBC)……………………………………………………18 D、細胞鬆弛素－B處理(Cytochalasin B treatment)……………………………………………18 (Ⅱ) 心臟毒蛋白對完整紅血球的結合分析(Binding assay of CTX to the intact RBC)…………19 (十) 紅血球細胞膜之蛋白質及磷脂質利用Triton X－100及氫氧化鈉作選擇性的萃取(Selective Solubilization of proteins and phospholipids from RBC membrane by Triton X-100 and NaOH)……………20 (十一) Triton X-100及氫氧化鈉抽取後，抽出液及殘留物的化學組成(Chemical composition of Triton X-100 and NaOH extraction)……………………………………………………20 (十二) 利用螢光劑來研究心臟毒蛋白的結合部位(The use of fluorescent probes for the studies of CTX binding sites)……………………………………………………21 Ⅳ、結果(RESULTS) 一、CTX的分離純化與純質鑑定(Isolation purification and homogeneity of CTX)…………………………22 二、血球細胞的處理(Treatment of red blood cells)……………………………………………………22 三、紅血球細胞的溶血作用(CTX-induced red cell lysis)……………………………………………………23 四、結合分析(Binding assay)……………………………………………………25 五、CTX的化學修飾(Chemical modification of CTX)……………………………………………………26 六、螢光技術(Fluorescence technique)……………………………………………………27 七、CTX在細胞內結合部位之研究(The studies of binding site of CTX on cell membrane)………………28 Ⅴ、討論(DISSUSIONS)……………………………………………………31 Ⅵ、英文提要(ENGLISH ABSTRACTS)……………………………………………………34 Ⅶ、圖表說明(LEGENDS OF FIGURES AND TABLES)……………………………………………………43 Ⅷ、參考文獻(REFERENCES)……………………………………………………77 Ⅸ、謝誌(ACKNOWLEDGMENTS)……………………………………………………81 | |
| dc.language.iso | zh-TW | |
| dc.title | 臺灣飯匙倩心臟毒蛋白於人類紅血球結合部位之研究—分子層次之作用機制探討 | zh_TW |
| dc.title | STUDIES OF BINDING SITE OF TAIWAN COBRA CARDIOTOXIN ON HUMAN ERYTHROCYTES－AN APPROACH TO EXPLORE THE ACTION MECHANISM IN MOLECULAR LEVEL | en |
| dc.date.schoolyear | 71-2 | |
| dc.description.degree | 碩士 | |
| dc.relation.page | 81 | |
| dc.rights.note | 未授權 | |
| dc.contributor.author-dept | 生命科學院 | zh_TW |
| dc.contributor.author-dept | 生化科學研究所 | zh_TW |
| 顯示於系所單位： | 生化科學研究所 | |
文件中的檔案：
沒有與此文件相關的檔案。
系統中的文件，除了特別指名其著作權條款之外，均受到著作權保護，並且保留所有的權利。