補骨脂種子乙醇萃取物對單核球增多性李斯特菌及多重抗藥性金黃色葡萄球菌之抗菌效果分析

Abstract

補骨脂在傳統醫療上常被作為治療腎炎及白癲風的藥用植物，其種子萃取物含有許多的化合物，並具多種生物活性。本實驗採用補骨脂種子乙醇萃取物，針對食源性細菌進行抑菌能力分析及探討其可能的抑菌機制。結果顯示，補骨脂種子乙醇萃取物(Psoralea corylifolia seeds ethanol extracts, PCEE)能抑制革蘭氏陽性菌L. monocytogenes (LM)和multidrug-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)。以濃度128000 μg/mL的PCEE，對菌量106 cfu的LM和MRSA進行瓊脂井化擴散試驗，抑菌圈大小分別為17和16 mm；進一步進行最小抑菌濃度(MIC)及最小殺菌濃度(MBC)試驗，菌量105 cfu的LM和MRSA有相同的最小抑菌濃度50 μg/mL，且分別在4及14小時，能被最小殺菌濃度100 μg/mL完全殺死。由上升的核酸、蛋白質及導電度數值可顯示PCEE能作用在細胞膜並造成不可逆的影響，在掃描式電子顯微鏡下觀察，也可看出經PCEE作用後的細菌，細胞膜完整性遭破壞，甚至出現變形及裂解的結果。以即時定量聚合酶連鎖反應的基因表現量結果中，添加了PCEE後，對於細菌多藥外排相關基因產生影響，在濃度100 μg/mL的PCEE處理下，109 cfu 的LM中mdrL、mdrT、lde和MRSA中的mepA基因表現量些微上升，因這些基因與排出染劑、巨環黴素、四級銨、氟奎諾酮類藥物和膽酸相關，透過基因的上調，增加細菌的存活機會；而PCEE也會透過消耗外排幫浦之所需能量，使MRSA中的norA和abcA基因表現量顯著下降(P<0.05)，提升對於奎諾酮、β-內醯胺類藥物的敏感性。而將PCEE作用於由潮鯛生魚片生產廠中分離出的20株LM，得到MIC為6.25-50 μg/mL，對於豬場及肉品市場所採集的豬隻鼻腔和環境廢水分離出的10株SA，MIC為 50-100 μg/mL，顯示了PCEE對LM和SA野外株的確具有抑菌效果。而從PCEE中所提取的補骨脂(bakuchiol)純物質，對菌量105 cfu的LM和MRSA有良好的抑菌效果，最小抑菌濃度為1.56 μg/mL。綜上所述，我們可以推測補骨脂種子乙醇萃取物會改變LM和MRSA的細胞膜完整性、通透性、細菌型態，及影響多藥外排相關基因表現量，進而有效對抗LM和MRSA，並有機會使用於醫療上對於LM和MRSA等菌的控制。