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| DC 欄位 | 值 | 語言 |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | 呂廷璋 | |
| dc.contributor.author | Shih-Ting Wang | en |
| dc.contributor.author | 王詩婷 | zh_TW |
| dc.date.accessioned | 2021-05-16T16:18:03Z | - |
| dc.date.available | 2019-09-20 | |
| dc.date.available | 2021-05-16T16:18:03Z | - |
| dc.date.copyright | 2013-08-28 | |
| dc.date.issued | 2013 | |
| dc.date.submitted | 2013-08-16 | |
| dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/5888 | - |
| dc.description.abstract | 單株抗體已普遍使用於研究植物細胞結構。本論文擬以酵素水解、陰離子樹脂層析、高效能分子篩層析法 (high performance size excluion chromatography, HPSEC) 與酵素連結免疫分析法 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 分析西洋參水溶性不可消化多醣之分子結構特徵。將去除蛋白質的西洋參粗多醣，以酵素水解除去澱粉，得到水溶性不可消化多醣，以陰離子交換樹脂層析系統，依流洗鹽濃度分離為F1、F2、F3、及F4四個區分。將各區分以HPSEC分析，搭配ELISA assay進行分子結構快速辨識與化學分析確認，使用LM2、LM5、LM6、LM7、LM10、LM19、LM20與JIM7進行免疫親和反應。其中LM2及LM5被認為可代表arabinogalactan type II (AGII) 與 arabinogalactan type I (AGI) 結構。F1與F2多醣區分於鹽濃度為0–0.1M時出現，組成為arabinose與galactose，與LM5、LM6有親和反應，表示具有s-(1→4)-galactan及linear arabinan分支。F3、F4多醣區分於鹽濃度為0.1–018M出現，具有酸性糖galacturonic acid與glucuronic acid，此二區分除了對於LM2、LM5及LM6有親和反應外，以酸性糖為主要組成之F4對於LM19具有相當高的親和性，顯示此二區分具有partially methyl esterified HG以及RGI結構與AGI、AGII及linear arabinan等分支，此外四個區分對於LM10皆無親和反應，並不具有xylogalacturonan或xylan等結構。 | zh_TW |
| dc.description.abstract | This study used high performance size exclusion chromatography (HPSEC) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to characterize the distribution of different epitopes within four fractions separated by DEAE chromatography of water soluble nondigestible polysaccharides. Water-soluble nondigestible polysaccharides were obtained from deproteinized crude polysaccharides subjected to starch hydrolyzing enzymes to remove the starch. DEAE chromatography can divide water-soluble nondigestible polysaccharides to four fractions (F1-F4) by different concentration of the eluent. Monoclonal antibodies have been widely used in studies of plant cell structures. The mAbs LM2, LM5, LM6, LM7, LM10, LM19, LM20 and JIM7 were used in this research. The LM2 and LM5 resemble the AGII and AGI structures. F1 and F2 were observed when the eluent salt concentration was 0 to 0.1M. They are composed of arabinose and galactose, and the Mw are 71 and 116 kDa, respectively. Binding of F1 and F2 to LM5 and LM6 indicated the presence of RGI material with both arabinan and the AGI side chains. On the otherhand, F3 and F4 were observed when the eluent salt concentration was 0.1 to 0.18M. In addition to the arabinose and galactose, there are acidic polysaccharides such as galacturonic acid and glucuronic acid for F3 and F4. Affinity to AGII (LM2), AGI (LM5), arabinan (LM6) and partially methyl esterified HG (LM19) were mainly observed in F3 and F4. It was also observed that F4 had a very high affinity to partially methyl esterified HG (LM19), indicating that it is mainly composed of an acid glycoprotein. Lastly, the four fractions had no observed immunoaffinity to LM10, indicating that there were no xylan or xylogalacturonan structures in the fractions. | en |
| dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-05-16T16:18:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-102-R00641020-1.pdf: 3795943 bytes, checksum: 521aa24e2bf636a9fbebbbf9d549d9d0 (MD5) Previous issue date: 2013 | en |
| dc.description.tableofcontents | 謝誌 i
摘要 iii Abstract iv 目錄 I 圖目錄 V 表目錄 VII 壹、前言 1 貳、文獻回顧 2 第一章、西洋參 2 第一節、生物分類 2 第二節、形態特徵 2 第三節、活性成分 2 3.1 多醣類 3 3.2 皂甘類 3 第四節、生理活性 5 4.1 抑制急性呼吸道病症 5 4.2 抑制腫瘤生長 6 第二章、果膠多醣 7 第一節、結構與分類 7 1.1 Homogalacturonan (HGA) 8 1.2 Xylogalacturonan (XGA) 9 1.3 Rhamnogalacturonan-I (RG-I) 10 1.3.1 Arabinan 10 1.3.2 Arabinogalactan type I (AGI) 10 1.3.3 Arabinogalactan type II (AGII) 11 1.4 Rhamnogalacturonan II (RG-II) 11 第二節、果膠多醣之結構與生理活性 12 第三章、多醣的分離與純化 15 第一節、分級沉澱法 15 第二節、鹽析法 15 第三節、金屬錯合法 15 第四節、管柱層析法 16 4.1 離子交換層析法 16 4.1.1. 固定相 17 4.1.2. 流動相 17 4.2 分子篩選層析法 17 4.2.1. 固定相 18 4.2.2. 移動相 19 4.2.2.1.改變pH值 19 4.2.2.2.改變鹽濃度 19 第四章、免疫檢測方法 20 第一節、基礎介紹 20 第二節、抗原與半抗原種類 20 第三節、抗體種類 21 第四節、酵素連結免疫吸附試驗 22 4.1 固定相 22 4.2 阻塞 22 4.3 呈色劑 22 4.4 ELISA方式 23 第五節、單株抗體 25 5.1 LM2單株抗體 25 5.2 LM5單株抗體 25 5.3 LM6單株抗體 26 5.4 LM7單株抗體 26 5.5 LM10單株抗體 26 5.6 LM19單株抗體 27 5.7 LM20單株抗體 27 5.8 JIM7單株抗體 27 5.9 單株抗體與植物細胞壁多醣親和反應之應用 28 參、試驗流程圖 32 肆、材料與方法 33 第一章、實驗材料 33 第一節、西洋參樣品 33 1.1 來源 33 1.2 熱水萃取物之製備 33 1.3 水溶性粗多醣之製備 33 1.4 水溶性可消化多醣及不可消化多醣之製備 33 1.5 陰離子交換樹脂層析之水溶性不可消化多醣區分 34 第二節、實驗藥品與試劑 35 2.1 化學藥品與試劑 35 2.2 標準品 36 2.3 抗體 36 2.4 酵素 36 2.5 磷酸緩衝液配製 36 2.5.1.一般磷酸緩衝液配製 36 2.5.2.不同pH值之磷酸緩衝液配製 36 2.5.3.不同NaCl濃度之磷酸緩衝液配製 37 第三節、儀器設備 37 第四節、化學分析方法 38 4.1 總醣含量測定 38 4.2 α-D-glucose含量測定 38 4.3 醛糖酸含量測定 38 4.4 蛋白質含量測定 39 4.5 KDO含量測定 39 4.6 酵素連結免疫吸附法 39 4.7 單醣組成分析 40 4.7.1. 待測樣品前處理 40 4.7.2. 三氟醋酸水解 40 4.7.3. 甲酯化反應 41 4.7.4. 分析系統 41 4.8 分子量測定 42 4.8.1. 待測樣品前處理 42 4.8.2. 標準品 42 4.8.3. 分析系統 42 4.9 HPSEC串聯ELISA assay 43 第五節、統計分析 43 伍、結果與討論 44 第一章、水溶性不可消化多醣 44 第一節、水溶性不可消化多醣區分之組成分析 44 第二節、水溶性不可消化多醣中各多醣區分之分子量 46 第二章、酵素連結免疫吸附分析法最適化條件分析 50 第一節、Coating buffer之pH值與離子強度對抗原吸附反應之影響 50 第二節、高劑量鈎狀效應 54 第三章、水溶性不可消化多醣中各多醣區分之單株抗體親和力結果 61 陸、結論 69 柒、參考文獻 71 捌、附錄 87 | |
| dc.language.iso | zh-TW | |
| dc.title | 以高效能分子篩層析法與酵素連結免疫分析法分析西洋參水溶性不可消化多醣之分子結構特徵 | zh_TW |
| dc.title | Fingerprinting water-soluble nondigestible polysaccharides of Panax quinquefolius by high performance size exclusion chromatography combined with enzyme-linked immunosorbent assay. | en |
| dc.type | Thesis | |
| dc.date.schoolyear | 101-2 | |
| dc.description.degree | 碩士 | |
| dc.contributor.oralexamcommittee | 駱錫能,盧訓,賴鳳羲,張永和 | |
| dc.subject.keyword | 高效能分子篩層析法,酵素連結免疫分析法,高劑量鈎,狀效應,單株抗體, | zh_TW |
| dc.subject.keyword | high performance size excluion chromatography (HPSEC),enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),the high dose hook effect,monoclonal antibody, | en |
| dc.relation.page | 102 | |
| dc.rights.note | 同意授權(全球公開) | |
| dc.date.accepted | 2013-08-16 | |
| dc.contributor.author-college | 生物資源暨農學院 | zh_TW |
| dc.contributor.author-dept | 食品科技研究所 | zh_TW |
| 顯示於系所單位： | 食品科技研究所 | |
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|---|---|---|---|
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