EB病毒Rta蛋白質活化ATF-2所調控基因的轉錄活性

Abstract

Epstein-Barr virus (EBV) 進入溶裂循環需要病毒極早期基因BRLF1與BZLF1轉錄出Rta與Zta蛋白質協同啟動溶裂循環。Zta可以直接結合上BRLF1的啟動子，Rta卻無法直接結合至BZLF1的啟動子，而是須藉由MAPK、JNK或ERK路徑活化ATF2，讓ATF2結合至ZII區域，促進BZLF1的轉錄。本實驗室先前發現MCAF1能做為Rta與Sp1的中介者，活化基因的轉錄，且在老鼠體內MCAF1的異構物mAM也被證實能與ATF2結合，因此本研究的目的是要探討Rta、MCAF1與ATF2之間的關係。首先利用免疫共沉澱分析與GST pull-down發現MCAF1與ATF2能直接結合，讓Rta透過MCAF1與ATF2形成複合體，且其中ATF2的第1至第119的胺基酸位置與第324到505的胺基酸位置能和MCAF1上的功能性胺基酸區域 Domain 1與Domain 2 結合。然後利用CHIP assay證明Rta-MCAF1-ATF2複合體會結合至含有AP-1結合序列的DNA片段上。接著使用冷光活性分析發現Rta能活化具AP-1序列啟動子的轉錄，且冷光值會隨著ATF2或MCAF1蛋白質表現量增加而上升；而利用dominant negative的ATF2或siRNA抑制MCAF1表現，則Rta活化AP-1序列的能力也被降低。接著透過冷光活性分析發現ATF2或MCAF1的異常表現也會影響Rta活化BZLF1啟動子的轉錄活性，證明Rta確實能以此複合體的形式，結合至BZLF1啟動子的ZII區域，進而促進BZLF1的轉錄。另外，Rta也能促進宿主細胞內BIC mRNA的表現，影響宿主細胞的生理功能。因此本篇研究結果證實Rta能藉由與MCAF1結合影響受ATF2轉錄因子調控基因的轉錄活性，可能對於誘導EBV進入溶裂循環相當重要。