研究靈芝多醣PSG與蛋白LZ8之免疫調節功效及成分規格標準

Abstract

靈芝 (Ganoderma lucidum (Fr.) Karst) 已知的功效成分包含多醣與免疫調節蛋白 LZ8，但是此兩者調節免疫之對象與機制之差異仍不清楚。本研究第一部份即為探討靈芝多醣PSG與蛋白LZ8對於小鼠腹腔巨噬細胞及脾細胞的活化作用，並檢視兩者對於調節細胞免疫功能之差異；第二部份則建立LZ8酵素連結免疫分析之定量平台，同時定量市售樣品中靈芝蛋白LZ8的含量，以及比較樣品中活性成分多寡與小鼠脾細胞活化作用之相關性。 第一部份結果發現，靈芝多醣PSG可活化小鼠腹腔巨噬細胞分泌TNF-alpha，但靈芝蛋白LZ8則是活化腹腔巨噬細胞分泌IL-12，顯示PSG與LZ8活化巨噬細胞分泌不同的細胞激素。另外，LZ8能直接活化小鼠脾細胞與 CD4+ T細胞產生IFN-gamma 與IL-2，同時提高 Th1 相關之細胞激素 mRNA 表現量，但PSG只能活化脾細胞分泌IL-2，且對於CD4+ T細胞則無活化的作用。另一方面，以PSG和LZ8分別活化小鼠腹腔巨噬細胞，再將活化後的巨噬細胞與 CD4+ T細胞共同培養，結果發現經過LZ8處理後的腹腔巨噬細胞，能促進CD4+ T細胞分泌IFN-gamma與IL-2，而PSG處理後之腹腔巨噬細胞，只能促進CD4+ T細胞分泌IL-2，且分泌量較少。此外， PSG與LZ8對TLR4缺失小鼠腹腔巨噬細胞共同培養後，PSG無法活化其分泌TNF-alpha，但仍可促進IL-1 beta 與IL-12的分泌，且PSG與TLR4缺失之腹腔巨噬細胞共同培養後，仍可促進CD4+ T分泌IL-2，故推測其活化的作用來自PSG中所含的微量LZ8。上述結果說明了靈芝蛋白LZ8對於活化T淋巴細胞的效果較顯著。 第二部份利用單株抗體建立 LZ8 之 ELISA 分析方法，其定量曲線(y = 0.0019 x + 0.2973)之線性係數 r2 = 0.9806，定量濃度範圍在0.15 – 200 μg/mL，以此方法來定量四種市售樣品中LZ8含量，其含量介於 0.58 - 11.76 μg/g。此外，分析各市售樣品中LZ8與PSG含量對活化脾細胞之相關性，發現樣品中LZ8含量多寡對於小鼠脾細胞IFN-gamma產生量，具有良好的相關性(r2 = 0.8502)，因此 LZ8 含量與其活化小鼠脾細胞產生IFN-gamma之作用，可作為快速評估靈芝樣品活性成份與規格標準的指標。