探討基因突變、蛋白質表現及腫瘤分級在犬黑色瘤之相關性

Abstract

⿊⾊素瘤是由⿊⾊素細胞或⿊⾊素母細胞異常增⽣所造成的。KIT 是⼀種受體型酪氨酸激酶 (Receptor tyrosine kinase)，對⿊⾊素細胞之增殖、遷徙及存活扮演很重要的角⾊。NRAS 是⼀群小的三磷酸鳥苷酶 (GTPase)，與許多細胞的增殖、遷徙及存活有關。我們先前的研究分別在⽝⿊⾊素瘤細胞和組織發現 KIT L578P (T1733C) 和 NRAS Q61K (C181A) 突變，這兩個基因突變都是⼈⿊⾊素瘤的病因，因此我們想探討這兩個突變與⽝⿊⾊素瘤的關係。首先我們從台⼤動 物醫院病理資料庫收集了源自於130 個動物的139 個⽝⿊⾊素瘤組織蠟塊，其中的91 個組織以組織免疫化學染⾊法評估蛋白質的表現，結果 KIT 蛋白質表現評估為強、中、弱及陰性的，分別有45% (41/91)、22% (20/91)、32% (29/91) 及1% (1/91)，⽽ NRAS 蛋白質表現評估為強、中、弱及陰性的，分別有76%(69/91)、9% (8/91)、15% (14/91) 及0% (0/91)。另外有73 個檢體的 DNA，我們 以聚合酶連鎖反應搭配限制酶片段長度多形性 (Polymerase chain reactionrestricted fragment length polymorphism, PCR-RFLP) ⽅法進⾏基因型篩檢，結果顯示分別有16% (12/73) 及75% (55/73) 的腫瘤帶有 KIT L578P (T1733C) 及 NRAS Q61K (C181A) 突變，我們也首次在⽝⿊⾊素瘤組織發現 NRAS Q61E (C181G) 突變；但另⼀項技術-⾼解析度熱溶解曲線分析 (High-resolution melting curve analysis, HRM) 無法成功被應用於本研究之基因型篩檢。最後我們將上述的結果分別與腫瘤類型、位置及分級進⾏交叉分析，結果發現發⽣在嘴唇的⽝⿊⾊素瘤，其 NRAS 的表現會增加 (p<0.05)；另外，有 KIT L578P 突變的非⼝腔型⿊⾊素瘤，其 KIT 蛋白質表現會增加 (p<0.05)；其它的交叉分析就沒有關聯性。