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| DC 欄位 | 值 | 語言 |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | 張鴻民;吳瑞碧 | |
| dc.contributor.author | Nien-Chen Lin | en |
| dc.contributor.author | 林念蓁 | zh_TW |
| dc.date.accessioned | 2021-06-13T06:03:26Z | - |
| dc.date.available | 2011-07-06 | |
| dc.date.copyright | 2006-07-06 | |
| dc.date.issued | 2006 | |
| dc.date.submitted | 2006-06-20 | |
| dc.identifier.citation | 水野卓，川合正允，賴慶亮譯，1997。菇類的化學、生化學。國立編譯館，
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| dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/34331 | - |
| dc.description.abstract | 本研究以黑豆為發酵基質之巴西洋菇發酵產物為樣品進行體外及
體內之免疫活性分析，實驗內容主要包含三部分，首先探討以黑豆為 發酵基質之巴西洋菇發酵樣品於體外實驗對人類白血病細胞株 (U937) 之生長抑制作用及刺激鼠巨噬細胞RAW 264.7，觀察其分泌TNF-α 及 Nitric oxide 之活性，藉以選出最具提升免疫活性之樣品濃度後再進行 動物模式評估，將樣品濃度區分為低、中及高劑量分別為 150、300 及600 mg/kg bw，依據健康食品之非特異性免疫調節功能評估法探討 巴西洋菇發酵產物對Balb/c 小鼠的非特異性免疫調節能力。最後，針 對巴西洋菇發酵產物生理活性成分利用Con A Sepharose 4B 親合性管 柱層析進行初步純化免疫調節蛋白。 非特異性免疫功能評估結果顯示，樣品並不會影響小鼠正常生長 情形及組織重量；於中、高劑量可增加血清中 IgG 抗體分泌量及增加 小鼠脾臟中毒殺型 T 細胞比例；三組劑量皆具有刺激脾臟細胞增生的 能力及顯著增加脾臟細胞之細胞激素IL-2、IFN-γ及TNF-α分泌量；各 劑量組血液中單核細胞球或嗜中性白血球之吞噬能力顯著提升；高劑 量組顯著增加小鼠脾臟中自然殺手細胞之毒殺能力。 體外實驗發現經親和性管柱純化所得之免疫調節蛋白與人類週邊 血液單核細胞培養一天後，以流式細胞儀分析細胞表面抗原結果顯示 2 CD3(+) T細胞及CD56(+)自然殺手細胞比例顯著增加。樣品蛋白質濃度 為7.4 μg/mL 及 11.1 μg/mL 與人類周邊血液單核細胞培養一天收集 條件培養液，與人類白血病細胞培養五天後之細胞生長抑制率分別達 87.7 %及91.3 %；樣品組之U937細胞CD11b及CD14陽性表現率顯著高 於控制組，顯示巴西洋菇發酵產物中免疫調節蛋白條件培養液具有誘 導U937細胞分化為成熟單核球及巨噬細胞的能力。此外免疫調節蛋白 進行 Sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE) 分析後約估分子量為32 kDa，可被Con A 親和性管柱吸附，經 醣蛋白染色推測其含多醣及蛋白質成分，經由血球凝集活性試驗發現 對人類O型及B型紅血球不具有凝集活性。 | zh_TW |
| dc.description.abstract | In the present research, submerged fermentates of Agaricus blazei
(AB), cultured under various conditions, were first screened based on the observation of the U937 cell growth inhibition and the activity of stimulating mouse macrophage cell line RAW 264.7 cells to secret TNF-α and Nitric oxide. The dosages which had the highest bioactivities in vitro were evaluated for the non-specific immunomodulatory effects of fermentates in balb/c mice by oral administration of low (150 mg/kg/ bw/day), medium (300 mg/kg/ bw/day), and high (600 mg/kg/ bw/day) dosages on the basis of the regulations of “Health-Promoting Food” of FDA, Taiwan. The purification and immunobioactivities of immunomodulatory proteins from submerged fermentates of Agaricus blazei were also investigated. Evaluation of the non-specific immunomodulatory effects showed that all the three dosages did not affect the growth and tissue weight of Balb/c mice.The medium and high dosages were significantly (P<0.05) enhancing the antibody (IgG) secretion and increasing CD8+ cytotoxic T cells of splenocytes. All the three dosages were effective in promoting splenocytes proliferation and cytokines (TNF-α, IL-2 and IFN-γ) secretion (P<0.05). Phagocytosis activities of blood granulocytes or monocytes were significantly improved at all the three dosages. The high dosage significantly (P<0.05) enhances the cytotoxic activity of natural killer cells of splenocytes. Incubating the immunomodulatory proteins with human peripheral blood mononuclear cells (MNCs) for one day revealed that the positive percentages of cell surface marker CD3 (T cell) and CD56 (NK cell) were 4 increased by flowcytometry analysis. The immunomodulatory proteins (7.4 and 11.1 μg/mL) were used to stimulate MNCs for one day to prepare conditioned medium, then incubated the U937 cells with the medium for five days to evaluate growth inhibition. The U937 cells growth inhibition reached 87.7 % and 91.3 % respectively. In addition, the expression of monocyte-associated cell surface marker CD11b and CD14 on U937 cells showed that the positive percentages of CD11b and CD14 were much increased after immunomodulatory proteins treatment, revealing that the immunomodulatory proteins have the effect of antiproliferation and differentiation of U937 cell line. SDS-PAGE electrophroresis found that the purified immunomodulatory proteins sized about 32 kDa. PAS staining revealed that the immunomodulatory proteins might be consist of polysaccharides and proteins. The hemagglutining activity assay showed that the immunomodulatory preteins were not lectin. | en |
| dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-06-13T06:03:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-95-R93641025-1.pdf: 920492 bytes, checksum: 0c2f530f1884c16d4d26c7436ed7325b (MD5) Previous issue date: 2006 | en |
| dc.description.tableofcontents | 中文摘要……………………………………………………………………………1
英文摘要……………………………………………………………………………3 目錄…………………………………………………………………………………5 表目錄………………………………………………………………………………9 圖目錄……………………………………………………………………………..10 第一章 文獻回顧 一、巴西洋菇簡介…………………………………………………………..12 二、巴西洋菇主要化學成分………………………………………………..12 三、巴西洋菇生理活性之研究……………………………………………..15 (一) 抗腫瘤活性………………………………………………………..15 (二) 免疫調節活性……………………………………………………..17 (三) 抗氧化活性………………………………………………………..18 (四) 其他活性…………………………………………………………..19 四、豆科發酵基質-黑豆…………………………………………………….20 (一) 黑豆簡介…………………………………………………………..20 (二) 黑豆之營養成分及生理功效……………………………………..20 1. 抗癌及調節免疫機能………………………………………....20 2. 抗氧化活性……………………………………………………21 3. 其他活性………………………………………………………21 五、免疫系統………………………………………………………………...22 (一) 先天性免疫反應…………………………………………………...22 1. 身體性屏障……………………………………………………22 2. 生理性屏障……………………………………………………22 3. 噬菌性屏障……………………………………………………23 4. 發炎反應………………………………………………………23 (二) 後天性免疫反應…………………………………………………...24 1. 參與後天性免疫反應的細胞………………………………….24 2. 體液免疫及細胞免疫反應之功能…………………………….26 (三) 自然殺手細胞……………………………………………………...28 (四) 免疫球蛋白之生成與功能………………………………………...28 1. 免疫球蛋白G………………………………………………….29 2. 免疫球蛋白M…………………………………………………29 3. 免疫球蛋白A………………………………………………….30 4. 免疫球蛋白E…………………………………………………..30 5. 免疫球蛋白D…………………………………………………..30 (五) 細胞激素……………………………………………………………31 6 1. 干擾素…………………………………………………………31 2. 間白素…………………………………………………………32 3. 腫瘤壞死因子…………………………………………………32 4. 其他細胞激素…………………………………………………32 六、白血病…………………………………………………………………...33 (一) 急性白血病………………………………………...........................34 (二) 慢性白血病………………………………………...........................34 七、人類白血病細胞株 U937……………………………………………….35 (一) U937 細胞株分化之評估…………………………………………...35 1. 細胞之貼附性及形態變化…………………………………….35 2. NBT 還原試驗………………………………………………...36 3. 非特異性脂酶 (nonspecific esterase, NSE) 染色法………….36 4. 吞噬試驗……………………………………………………….36 5. 細胞表面抗原分析…………………………………………….37 八、流式細胞技術……………………………………………………………37 九、健康食品之免疫調節功能評估…………………………………………38 十、研究目的與實驗設計……………………………………………………39 第二章 材料與方法 一、以人類周邊血液單核細胞探討巴西洋菇發酵產物之免疫活性…………42 (一) 實驗流程……………………………………………………………...42 (二) 實驗材料……………………………………………………………...43 1. 實驗樣品來源…………………………………………………….43 2. 實驗細胞………………………………………………………….43 3. 實驗藥品及試劑………………………………………………….43 4. 實驗器材與儀器………………………………………………….44 (三) 實驗方法與步驟……………………………………………………...46 1. U937 細胞株培養………………………………………………...46 2. 樣品之前處理…………………………………………………….48 3. 分離人類單核細胞……………………………………………….48 4. 製備條件培養液………………………………………………….48 5. U937 生長抑制作用 (間接模式)………………………………...49 6. 樣品刺激RAW 264.7 產生一氧化氮試驗……………………….50 7. 樣品刺激RAW 264.7 分泌TNF-α 之作用……………………...52 8. 統計分析…………………………………………………………..53 二、巴西洋菇發酵產物對Balb/c 鼠體內分特異性免疫反應之影響………….54 (一) 實驗流程……………………………………………………………….54 (二) 實驗材料……………………………………………………………….55 1. 實驗樣品來源……………………………………………………..55 7 2. 動物飼料…………………………………………………………55 3. 實驗動物…………………………………………………………55 4. 實驗藥品…………………………………………………………55 5. 實驗器材與儀器…………………………………………………57 (三) 實驗步驟與方法……………………………………………………...59 1. 動物飼養…………………………………………………………59 2. 實驗分組…………………………………………………………60 3. 體重紀錄……………………………………………………........60 4. 血樣之收集………………………………………………………60 5. 血液中吞噬細胞活性分析………………………………………61 6. 血清中非特異性抗體分析………………………………………61 7. 臟器之收集………………………………………………………63 8. 分離脾臟細胞……………………………………………………63 9. 脾臟細胞代謝活性分析…………………………………………64 10. 細胞激素分泌量之測定…………………………………………65 11. 脾臟細胞內免疫細胞表面抗原分析……………………………67 12. 自然殺手細胞活性分析…………………………………………67 13. 統計分析…………………………………………………………68 三、巴西洋菇發酵產物免疫調節蛋白之初步純化區分及免疫活性分析…...70 (一) 實驗流程……………………………………………………………...70 (二) 實驗材料……………………………………………………………...71 1. 實驗樣品來源…………………………………………………….71 2. 實驗藥品及試劑………………………………………………….71 3. 實驗器材與儀器………………………………………………….72 (三) 實驗步驟與方法……………………………………………………...73 1. 巴西洋菇發酵物水溶液粗萃硫酸銨沉澱物之製備…………….73 2. 巴西洋菇發酵物硫酸銨沉澱物中免疫調節蛋白之區分……….73 3. 人類周邊血液單核細胞條件培養液中細胞表面抗原分析…….75 4. U937 生長抑制作用 (間接模式)………………………………...75 5. 細胞表面抗原CD11b 及CD14 之分析…………………………76 6. 巴西洋菇發酵物免疫調節蛋白生化特性分析………………….77 7. 統計分析………………………………………………………….83 第三章 實驗結果 一、以人類周邊血液單核細胞及鼠巨噬細胞探討巴西洋菇發酵產物之免疫活 性……………………………………………………………………………84 (一) 樣品刺激人類周邊血液單核細胞一天之條件培養液對U937 細胞之 生長抑制作用 (間接模式)…………………………………………...84 (二) 樣品刺激RAW 264.7 產生一氧化氮試驗…………………………..84 8 (三) 樣品刺激RAW 264.7 分泌TNF-α 之作用………………………….85 二、 巴西洋菇發酵產物對Balb/c 鼠體內非特異性免疫反應之影響………..87 (一) 飼養期間體重及犧牲後組織重量變化………………………………87 (二) 血清中 IgG 抗體含量及變化量……………………………………..87 (三) 脾臟細胞代謝活性分析………………………………………………88 (四) 脾臟細胞條件培養液中細胞激素含量之變化………………………88 (五) 鼠周邊血液中顆粒性白血球之吞噬能力……………………………89 (六) 脾臟細胞內免疫細胞表面抗原分析…………………………………89 (七) 自然殺手細胞活性分析………………………………………………90 三、巴西洋菇發酵產物中免疫調節蛋白之初步純化區分及免疫活性分析… 91 (一) 巴西洋菇發酵物硫酸銨沉澱物中免疫調節蛋白之親和性管柱初步區分 結果……………………………………………………………….........91 (二) 人類周邊血液單核細胞條件培養液中細胞表面抗原析………........91 (三) 樣品刺激人類周邊血液單核細胞之條件培養液(MNC-CM)對U937 生 長抑制作用 (間接模式)........................................................................92 (四) U937 細胞表面抗原CD11b 及CD14 之分析………………………..93 (五) 巴西洋菇發酵物免疫調節蛋白生化特性分析……………………....93 1. 電泳檢定法…………………………………………………………94 2. 血球凝集活性試驗…………………………………………………95 第四章 討論……………………………………………………………………….97 第五章 總結………………………………………………………………………108 結果圖表……………………………………………………………………………110 參考文獻…………………………………………………………………………....133 附錄………………………………………………………………………………....144 9 表目錄 表一、 餵食不同劑量巴西洋菇發酵產物30天對Balb/c鼠組織重量之影響……..114 表二、 餵食不同劑量巴西洋菇發酵產物30 天對Balb/c 鼠血清中IgG 抗體含量及 變化量之影響………………………………………………………………115 表三、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30天對 Balb/c小鼠脾臟中各類免疫細胞之 影響…………………………………………………………………………122 表四、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30天對 Balb/c 小鼠脾臟中自然殺手細胞 活性之影響 (E/T ratio = 40：1)…………………………………………...123 表五、 人類單核球細胞 (MNC) 與不同濃度巴西洋菇發酵物蛋白質區分物培養一 天後之細胞各表面抗原陽性表現率 (%)…………………………………125 表六、 巴西洋菇發酵物各階段萃出物之人類單核球細胞條件培養液對U937細胞生 長抑制率……………………………………………………………………126 10 圖目錄 圖一、 巴西洋菇新鮮子實體(a)及乾燥子實體(b)………………………………..14 圖二、 不同濃度巴西洋菇發酵產物刺激人類週邊血液單核球1 天之條件培養液 對U937 細胞之生長抑制率(%)………………………………………….110 圖三、 不同濃度巴西洋菇發酵產物刺激鼠巨噬細胞條件培養液中Nitrite 之含.. 量……………………………………………………..................................111 圖四、 不同濃度巴西洋菇發酵產物刺激鼠巨噬細胞條件培養液中Mouse TNF-α 之含量……………………………………………………………………..112 圖五、 餵食不同劑量巴西洋菇發酵產物30 天對Balb/c 鼠體重變化情形……113 圖六、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30 天對Balb/c 小鼠脾臟細增生能力的影 響 (PHA 刺激) ……………………………………………………………..116 圖七、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30 天對Balb/c 小鼠脾臟細增生能力的影 響 (LPS 刺激)………………………………………………………………117 圖八、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30 天Balb/c 鼠脾臟細胞經LPS (10 μg/mL 刺激48 小時後條件培養液中TNF-α 含量…………………………….....118 圖九、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30 天Balb/c 鼠脾臟細胞經PHA (20 μg/mL 刺激48 小時後條件培養液中IL-2 含量……………………………….....119 圖十、 餵食不同濃度巴西洋菇發酵產物30 天Balb/c 鼠脾臟細胞經PHA(20μg/mL) 刺激48 小時後條件培養液中IFN-γ 含量………………………………..120 圖十一、 餵食不同劑量巴西洋菇發酵產物30 天對Balb/c 鼠周邊血液(眼窩採血) 中顆粒球吞噬能力之影響………………………………………………121 圖十二、 巴西洋菇發酵產物水萃液硫酸銨沉澱物之Con A Sepharose 4B管柱層析 圖…………………………………………………………………………124 圖十三、 U937 間接抑制作用後細胞之CD 11b 陽性表現率 (%)……………...127 圖十四、 U937 間接抑制作用後細胞之CD 14 陽性表現率 (%)…………….....128 11 圖十五、 巴西洋菇發酵物不同階段萃出物之SDS PAGE 膠片圖…………….129 圖十六、 巴西洋菇子實體及發酵產物水萃液硫酸銨沉澱物Con A Sepharose 4B 區 分物之SDS-PAGE 膠片圖…………………………………………….130 圖十七、 巴西洋菇硫酸銨沉澱物Con A Sepharose 4B 區分物之CBR 染色及醣蛋 白染色…………………………………………………………………131 圖十八、 巴西洋菇發酵產物各階段萃取物之血球凝集活性…………………..132 | |
| dc.language.iso | zh-TW | |
| dc.subject | 免疫調節蛋白 | zh_TW |
| dc.subject | 非特異性免疫調節 | zh_TW |
| dc.subject | 巴西洋菇發酵物 | zh_TW |
| dc.subject | non-specific immunomodulatory effects | en |
| dc.subject | immunomodulatory proteins | en |
| dc.subject | Submerged Cultured Products of Agaricus blazei | en |
| dc.title | 巴西洋菇發酵物對BALB/c鼠之非特異性免疫調節及其免疫調節蛋白純化與生理活性之探討 | zh_TW |
| dc.title | Studies on the Non-specific Immunomodulation in BALB/c Mice and the Purification and Bioactivity of Immunomodulatory Proteins from Submerged Cultured Products of Agaricus blazei | en |
| dc.type | Thesis | |
| dc.date.schoolyear | 94-2 | |
| dc.description.degree | 碩士 | |
| dc.contributor.oralexamcommittee | 陳水田,江啟銘,廖慧芬,許輔 | |
| dc.subject.keyword | 巴西洋菇發酵物,非特異性免疫調節,免疫調節蛋白, | zh_TW |
| dc.subject.keyword | Submerged Cultured Products of Agaricus blazei,non-specific immunomodulatory effects,immunomodulatory proteins, | en |
| dc.relation.page | 154 | |
| dc.rights.note | 有償授權 | |
| dc.date.accepted | 2006-06-20 | |
| dc.contributor.author-college | 生物資源暨農學院 | zh_TW |
| dc.contributor.author-dept | 食品科技研究所 | zh_TW |
| 顯示於系所單位： | 食品科技研究所 | |
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