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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/25713
Title: | 草蝦alpha-2 macroglobulin基因啟動子的選殖與分析 Cloning and Analysis of the Alpha-2 Macroglobulin Promoter of the Black Tiger Shrimp (Penaeus monodon) |
Authors: | En-Sheng Dai 戴恩聖 |
Advisor: | 蔡懷楨(Huai-Jen Tsai) |
Keyword: | A2M基因,對蝦,(S2)細胞株,斑馬魚, alpha-2 macroglobulin,genomic DNA library,luciferase, |
Publication Year : | 2005 |
Degree: | 碩士 |
Abstract: | alpha-2 macroglobulin在對蝦為一血淋巴球專一性且具免疫可誘導性表現的基因,本實驗中由草蝦血球萃取genomic DNA,並建立一嵌入片段長度範圍約11.5 kb至14.5 kb,平均長度約13 kb的genomic DNA library (1×108 pfu/ml)。利用extender PCR及library screening的方式分別獲得在轉譯起始位前535 bp和1.2 kb的alpha-2 macroglobulin DNA片段;將此兩DNA片段構築在EGFP綠螢光報導基因後進行斑馬魚卵顯微注射,結果顯示兩DNA片段皆可驅動EGFP綠螢光報導基因在斑馬魚表現,表現率分別為30%和40%(n=300),在螢光表現率上1.2 kb片段表現能力較535 bp片段高出約10%;而在表現綠螢光的個體中,兩不同長度的片段均有70%為專一性強表現在肌肉束上。利用果蠅類巨噬細胞Schneider 2 (S2)細胞株進行轉染實驗,此兩DNA片段皆可驅動EGFP及firefly luciferase報導基因的表現;而在luciferase活性測試上,若以未含有啟動子的pGL3-basic empty vector為基礎比較,535 bp片段和1.2 kb片段表現能力分別為110倍(SD=16.3)和150倍(SD=18.0)。由上述斑馬魚螢光表現率和S2細胞luciferase活性測試,可推測1.2 kb的片段中可能包含有535 bp片段所沒有的cis-element來加強基因的表現。藉由斑馬魚系統和果蠅S2細胞株的實驗,可以證明草蝦A2M基因轉譯起始位前1.2 kb的DNA片段為一具有驅動基因強表現的DNA片段。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/25713 |
Fulltext Rights: | 未授權 |
Appears in Collections: | 分子與細胞生物學研究所 |
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