利用核酸適體作為基因治療及藥物載體抵抗癌症細胞抗藥性之研究

Abstract

在本研究中，為了解決多重抗藥性細胞對於化學治療藥物的不敏感性，我們利用人工合成的核酸適體做為同時攜帶化療藥物艾黴素 (doxorubicin-HCl)以及可抑制抗藥性基因表現之siRNA,進行合併治療的載體設計． 第一部分進行核酸適體是否能夠作為艾黴素藥物載體的探討，透過此complex物性的探討以及後續細胞毒殺能力以及細胞內藥物分布實驗的分析，我們發現未進行改殖的AS1411核酸適體並非艾黴素此種藥物的優良載體，必須要後續的改殖及條件調整，才可能改善兩者間鍵結的穩定，並使doxorubicin藥物可透過AS1411核酸適體專一性辨認核仁素的特性，逃脫藥物卡在核內體(endosomes)以及溶酶體(lysosomes)的宿命，使藥物能夠進入抗藥性細胞的細胞核中，達到毒殺能力． 第二部分則是利用卵白素 (streptavidin）以及生物素 (biotin)高度且專一的鍵結能力,將AS1411 核酸適體以及抑制抗藥性基因ADR1表現之siRNA均標定生物素，利用與卵白素結合後形成conjugates,以此conjugates作為抑制抗藥性細胞基因表現的新工具，由流式細胞儀分析的結果，證明此研究中所設計之conjugate的確具有抑制抗藥性基因的效果．

To overcome the drug resistance ability of MCF-7/ADR cells, a conjugate containg drug and siRNA was designed. AS1411 aptamer was used as the drug carrier and targeting ligand that specifically bind to nucleolin expressing MCF-7/ADR breast cancer cells. Moreover, the streptavidin-biotin system was used to construct the AS1411/siRNA/ streptavidin conjugate. Results showed that AS1411 aptamer is not a suitable carrier for doxorubicin drug, or more modifications should be done to make AS1411 aptamer a good doxorubicin carrier. Fourtunately, the silencing ability of AS1411aptamer/ streptavidin/ anti- ABCB1 siRNA conjugate was proved to work, about 50% p-glycoprotein expression was silenced by the siRNA delivered by the conjugate.