建立表現FLAG-RPB9細胞株研究RNA 聚合酶II 對於D型肝炎複製所扮演的角色

Abstract

D肝炎病毒是B肝炎病毒的衛星病毒，根據過去統計資料，全球約有1500~2000萬人感染B型肝炎和D型肝炎病。根據2020年的綜合分析，目前全球人口有約10.6% 的B型肝炎帶原者 (約6200~7200百萬人) 同時感染B及D型肝炎病毒。D型肝炎病毒感染分成兩種形式，其一是B肝炎病毒和D肝炎病毒同時共同感染，另一種為患有慢性B肝病毒感染患者再被D肝病毒感染。受到HBV和HDV感染可能會導致最嚴重的肝炎疾病 - 猛爆性肝炎。D肝病毒帶有1.7 kb的Genomic RNA 並會產生一種病毒蛋白-delta抗原，delta抗原 (HDAg)，由於該蛋白不具有聚合酶活性。因此，D型肝炎病毒必須利用部分宿主酵素來完成其生命週期。目前關於 D肝炎病毒複製中涉及的宿主酵素有兩種主要理論。其中一派認為RNA 聚合酶 II 參與了基因組和反基因組 RNA 複製，因為這兩個過程都對低劑量的 RNA 聚合酶 II 敏感抑製劑 α-鵝膏菌素敏感，而另一派認為 RNA聚合酶II以外的聚合酶可能參與基因組 RNA 的合成，因為α-鵝膏菌素在高濃度下無法阻斷反基因組 RNA 的合成。迄今為止，是否有 RNA 聚合酶 II以外的聚合酶否參與 D肝炎病毒的複製仍存有爭議。除了抑制劑實驗結果外，將RNA聚合酶II上的次單位以小分子干擾RNA減少表現後會使D型肝炎病毒感染率顯著下降。另一個研究指出，部分純化的RNA聚合酶II可以利用D型肝炎病毒的RNA在體外進行轉錄作用。基於前人研究，因此我們假設 RNA 聚合酶 II 參與了 D肝炎病毒的複製過程。為了驗證該假說，我們試圖透過建立在 RPB9（RNA 聚合酶 II 的一個次單位）上過量表達FLAG- RPB9的海拉細胞 (HeLa cell) 作為純化 RNA 聚合酶II，並分析 RNA 聚合酶 II 是否可以在體外轉錄D肝炎病毒的RNA。本研究提供RNA 聚合酶II純化所需的細胞株，為未來解決RNA 聚合酶II參與在D肝病毒複製過程中的爭議。