探索SLK和ROCK在細胞遷移的拮抗作用

Abstract

細胞遷移在許多生理程序中都扮演重要角色，因此研究細胞如何遷移成為一項重要的議題。我們實驗室先前利用「two-hit shRNA screening assay」，將119個與細胞遷移相關的基因個別敲減(knockdown)，並分別搭配給予三種訊息鏈的抑制劑。結果顯示ROCK抑制劑Y27632搭配敲減SLK基因，會大幅增加人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)的爬行速度。SLK(Ste20-like kinase)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，目前已知會影響細胞週期、附著力、細胞凋亡與細胞骨架。然而其中詳細作用機轉還未被研究清楚。 我們實驗室先前利用人類口腔上皮癌細胞SAS研究，發現knockdown SLK會使細胞爬行速度及細胞爬行的方向性都降低；另外，有文獻指出SLK在細胞爬行的前緣會產生聚集的現象。因此我們提出假說：SLK聚集在細胞前緣的現象可能會調控爬行方向性。以免疫螢光染色、活細胞影像及膜蛋白分離技術，我們證實過度表現的SLK的確會聚集在遷移細胞的前緣。未來計畫利用CRIPSR knockin綠螢光蛋白，以觀察內生性SLK的分布位置。 另一方面我們也致力於釐清SLK與ROCK之間的交互作用，目前我們認為SLK與ROCK並無直接的調控關係。近來數篇報導提出。近年來數篇報導提出SLK與ROCK同為RhoA下游的effector蛋白，意味著兩者可能存在間接的競爭關係。而其中一篇報導更使我們注意到lymphocyte-oriented kinase(LOK)蛋白與SLK在演化上與功能上的高度相似性。目前我們以西方墨點法(western blot)與免疫螢光染色觀察過度表現或knockdown SLK時，搭配其他調控RhoA/ROCK訊息鏈的藥物，觀察應力纖維(stress fiber)及黏著斑(focal adhesion)訊號隨之產生的變化。