探討重複表現EB病毒BGLF4蛋白對於核纖層完整性和基因組不穩定性之影響

Abstract

EB病毒 (Epstein-Barr virus) 感染了全球 90% 以上的人口。初次感染後，EBV 在宿主中潛伏，並可能會定期重新激活以產生子代病毒。 EBV 與各種淋巴瘤和上皮腫瘤有關，包括鼻咽癌和胃癌。血清學研究發現，針對 EBV 溶裂期蛋白質的高量抗體或 EBV 的反覆再激活與鼻咽癌的風險相關。在之前的研究中發現包括 BALF3 末端酶、BGLF5 DNA酶和 BGLF4 蛋白激酶在內的溶裂期蛋白會誘導基因組不穩定。另外，實驗室先前的研究證明 BGLF4 在 NPC 細胞中的重複表達誘導了核纖層的變形，並促進細胞通過小於細胞核大小的狹小孔洞。在本論文中，我們檢查了重複表達 BGLF4 對 lamin A/C、磷酸化核纖層完整性、DNA損傷和修復的訊號以及 NPC-TW01 細胞微核 (micronucleus) 形成的累積性的影響。通過使用去氧羥四環素 (doxycycline) 誘導系統的細胞株，我們發現 BGLF4 的重複表達降低了細胞生長速度。重複表達 BGLF4 三代（P3 ) 後，在共焦成像中觀察到細胞損傷指標γ-H2AX 焦點的數量顯著增加，而去活性的BGLF4 (K102I) 組則無看到此現象。雖然 BGLF4 和 γ-H2AX 訊號在 P5 細胞中的表達較低，但累積的損傷可能導致 BGLF4 表達細胞的負選擇，此外，核椎板突出的細胞增加且γ-H2AX信號在突出部位共位。然而，在疝氣狀突出處 (herniation site)未檢測到DNA損傷修復因子53BP1，推測細胞 DNA 損傷修復訊號可能受到核纖層變形所抑制，有待後續進一步釐清。此外，我們在胃癌細胞 AGS 中也試圖建立了去氧羥四環素誘導系統，以進一步檢查 BGLF4 重複表達的累積效應。而BGLF4對EBV表皮細胞癌症的致病機轉仍有待進一步研究探討。