建立B細胞清除誘導B型肝炎病毒再活化的小鼠模式

Abstract

臨床觀察中，HBV慢性感染者接受Rituximab藥物治療，體內B細胞大量清除後，有高機率發生HBV再活化，且伴隨肝損傷的症狀，因此我們認為B細胞在控制HBV的慢性感染上，扮演重要的角色。B細胞除了分化成漿細胞產生抗體外，也具有抗原呈現以及分泌細胞激素的能力，B細胞被清除後，可能影響其他免疫細胞的數量及功能，甚至改變肝臟免疫微環境，除此之外，目前已知肝細胞中Smc6蛋白可抑制HBV表現，因此我們推測B細胞清除所導致的免疫微環境改變可能進一步影響肝細胞中Smc6蛋白抑制HBV的能力，進而導致HBV再活化，為證實此推測，本研究將建立B細胞清除導致HBV再活化的小鼠模式。 本實驗使用HBV hydrodynamic injection的CBA小鼠模擬慢性感染，再以anti-CD20 (clone 5D2) 清除小鼠B細胞及合併prednisone觀察HBV再活化。實驗結果中，先初步測試anti-CD20及prednisone劑量，分別以75 μg及2.5 mg/kg並比照臨床治療B細胞淋巴瘤的R-CHOP療程投予藥物。於療程中，未觀察到小鼠血液HBV DNA上升的趨勢。除了檢測血液中HBV DNA，也偵測小鼠肝細胞HBV RNA及HBc蛋白於給藥前後的表現量，也未觀察到上升的趨勢。後續實驗則是透過觀察Smc6蛋白及肝臟免疫細胞族群分析，探討HBV再活化及背後潛在的機制，結果發現給予合併治療的小鼠肝臟Smc6蛋白量相較給藥前有所減少，但在肝臟免疫細胞族群分析並未觀察到明顯的改變。 根據研究結果，難以觀察HBV再活化現象，推測為小鼠無法被HBV再感染，HBV表現上升趨勢太過輕微，難以偵測。在宿主層面，小鼠給予治療後，肝臟免疫細胞組成並無明顯改變，這可能解釋小鼠未發生再活化的原因。但合併治療組別的Smc6給藥後有明顯下降，揭開HBV再活化背後的可能機制。