細胞蛋白質磷酸甘油酸激酶1 (PGK1) 在EB病毒複製過程中所扮演之角色

Abstract

疱疹病毒基因體在細胞核複製後，帶著病毒 DNA 的核殼體 (nucleocapsid) 會被運送到細胞質中進行膜蛋白包覆 (tegumentation)，加上細胞蛋白質和病毒蛋白質以及病毒披膜蛋白的套膜完成病毒組裝。EB 病毒蛋白激酶 BGLF4 是一個具有與 CDK1 功能相似的蛋白酶，可以促使微管組織中心(microtubule organization center, MTOC) 的形成。在先前的研究發現，除了在細胞核之外，BGLF4 會有小部分聚集至病毒組裝區域 (assembly compartment)，並且與 IQGAP1 有共定位的現象。IQGAP1 可以透過調控細胞骨架影響細胞附著以及移動能力。我們認為在表現 BGLF4 的情況下，IQGAP1 會將許多蛋白質帶到病毒組裝區域。在之前實驗室的共同免疫沉澱質譜儀分析結果中，發現在表現 BGLF4 的情況下磷酸甘油酸激酶 1 (PGK1) 與 IQGAP1 有相互作用。PGK1 在細胞中主要參與在糖解作用，PGK1 會將 1,3BPG 轉換成 3PG，同時產生一個 ATP。在本研究中，我們發現 PGK1 會聚集在病毒組裝區域，並且與粒線體有共定位的現象，然而目前的實驗方法無法觀察到在粒線體中的 PGK1。另一方面，我們想要知道剔除 PGK1 是否會影響病毒的複製以及病毒顆粒的組裝，因此我們利用 QPCR 的方式偵測細胞內外的病毒量，發現抑制 PGK1 蛋白質在 48 小時的時候對病毒 DNA 複製影響較小只會抑制病毒顆粒釋出細胞，而在 72 小時則會減少病毒 DNA 的複製以及病毒顆粒釋出細胞。我們也探討 PGK1 是否會影響到病毒組裝區域的蛋白質，而我們發現抑制 PGK1 後會些微影響到病毒蛋白酶 BGLF4 聚集至病毒組裝區域。我們認為 PGK1 可能在病毒組裝區域中扮演提供 ATP 的角色， 因此我們利用螢光共振能量轉移系統 (FRET) 觀察發現在病毒組裝區域中，ATP 的含量會上升，代表 PGK1 確實有可能在病毒組裝區域中提供許多 ATP。綜上所述，PGK1 聚集至病毒組裝區域在病毒成熟過程中扮演一個重要的角色，值得未來再進一步探討。

After EBV genome replication in the nucleus, nucleocapsids translocated into the cytoplasm through the nucleus egress process. Herpesviruses recruit several viral proteins and cellular components to complete the tegumentation and assembly in the cytoplasm, to facilitate the next round infection. BGLF4 is a CDK1-like protein kinase that can induces microtubule organization center (MTOC) redistribution. In EBV replicating epithelial NA cells, BGLF4 is partially distributed to viral cytoplasmic assembly compartment (AC) and co-localizes with IQ motif containing GTPase Activating Protein (IQGAP1), which is a cytoskeleton hub protein that can modulate cell adhesion and motility. We suggest that IQGAP1 may recruit certain host proteins to the AC to promote EBV in the presence of BGLF4. In the Mass analysis, phosphoglycerate kinase 1 (PGK1), which is an ATP-generating enzyme in the glycolytic pathway, was identified to interact with IQGAP1 in the presence of BGLF4. The appropriate formation of EBV AC may require additional energy for cytoskeleton rearrangement and protein trafficking. In this study, we demonstrated that PGK1 accumulated to the EBV AC and co-localizes with mitochondria. Knockdown of PGK1 causes the decrease of virion secretion at 48, 72 hours post-transfection and the virus DNA replication was reduced at 72 hours post-transfection. Moreover, we found that knockdown of PGK1 interferes with the accumulation of BGLF4 at AC. The ATP concentration at AC is increased after EBV reactivation. Overall, our data suggest PGK1 plays an important role in the EBV assembly and secretion.