乳膠凝集法的開發：調查台灣養殖魚蝦貝類病原弧茵 Vibrio vulnificus

Abstract

為發展快速、簡易、經濟及適合養殖現場應用的診斷試劑，以調查臺灣養殖魚蝦貝類帶病原菌的情形，本研究首先以Vibrio vulnificus為對象。V.vulnificus為病原弧菌，不僅感染水生生物也會造成人類急性腸胃炎、傷口感染，甚至敗血症，影響公共衛生甚?。實驗首先選取可能為 V. vulnificus 的11個本地菌株和代表菌株 LSU 11-3M-30(biogroup l)在61℃(Tm-25℃)進行DNA雜交結合反應(DNA-DNA hybridization)，確定 E。8G、2-45c以及2-60b三菌株為V．vulnificus。再利用單株抗體P3C3，已知可專一辨識V. vulnificus 15個菌株的表面抗原，被覆(coating)於高密度(1.5g/cm3)乳膠微粒(latex beads)上，製成輔凝集反應試劑，結果顯示塗蓋抗體的最適濃度為500ug/ml，靈敏度可達106cells/ml。為瞭解乳膠凝集法之可行性，採集七次不同種的養殖生物，將樣本研磨、澄清、取上清液經12小時enrich等前處理後，僅需加人凝集試劑一個步驟約三十分鐘完成操作；此外，並以細菌分離鑑定法佐證乳膠凝集法的正確性及靈敏度。希望此診斷試劑的應用可推廣至養殖現場，加強業者對病害的監控，同時此試劑亦可應用於進出口海產品的檢疫及食品中毒等案例。