泥鰍尾鰭細胞抗紫外線及抗藥性突變種之篩選及定性

Abstract

泥鰍尾鰭細胞（LF cells）是一種對紫外?（UV）相當敏感，而切除修復能力（excision repair）很弱的魚細胞。本實驗分二個部分?篩選對紫外?及Mitomycin C具高忍受力的泥鰍尾鰭細胞突變種（resistant mutants）?比較突變種細胞與正常細胞在接受DNA損傷因數（DNA damaging agents）處理後DNA合成受抑制的程度及細胞對DNA損傷之修復能力上的差異。 篩選突變種的方法為細胞或經突變劑EMS處理或未經突變劑處理後，以15J／m2／天之紫外?照射連續三次或以Mitomycin C 0.6μg／ml加入培養液處理七天後，存活之細胞繼續培養二至三星期，取單一細胞所長成細胞群落加以培養即為抗紫外?或抗Mitomycin C的突變種。 將所得的高忍受性突變種與正常細胞此較，其方法為，各以DNA損傷因數處理後，觀察?存活率—以單一細胞群落生成率（colony formation）來計算。?DNA合成速率後抑制的程度及時間。?細胞修補DNA損傷所造成DNA單鏈斷裂的數目。 結果顯示高忍受性突變種確實比正常細胞具有較高的存活率，而且DNA合成受抑制的程度較小而回復的速度較快。此外，抗紫外?及抗Mitomycin C突變種對其他的DNA損傷因數如MMS也有較高的忍受性。但測量DNA單鏈斷裂之結果卻無顯著差別，亦即不論突變種或正常細胞其切除修復能力都不發達。故結果顯示本實驗所選出的高忍受力突變種的存活與其切除修復能力無顯著相關。