具備高機械強度之多功能性鍍膜及其在強化幹細胞球體生長活性之研究

Abstract

為了使表面具有特定的功能性，進而提升各方面的應用價值，表面處理/改質技術一直是材料科學及界面科學等研究領域的熱門議題，不僅鞭策著改質能力的持續進步，技術的發展也根據不同需求而更加多元化，使得不論是製程與功能性都具有更多選擇性。 對於表面改質技術而言，改質層正在尋求表面化學的精確定義，且必須與基材間具有良好的附著強度，又同時維持本身的優秀化學特性，以確保在生物技術應用的長期穩定性和有效功能性。本研究為了提升幹細胞培養的效率與品質，期望使生物界面擁有更豐富的功能性，遂選用官能化前驅物，並利用化學氣相沉積（CVD）共聚後形成功能性聚對二甲苯（poly-p-xylylene，PPX）高分子鍍膜，其不僅具有高度的生物相容性，更擁有協同的化學改質能力。此一客製化製程將不受限於表面之幾何形狀，且利用雙向式（dual-source）的進料系統設計，可使表面同時帶有N-羥基琥珀醯亞胺（NHS）酯與馬來醯亞胺（maleimide）兩種官能基團，並經化學修飾後可作為幹細胞培養之生物界面。 由於材料被賦予穩定的可反應官能基，以化學共價結合的表面改質方法便可順利達成，此外，藉由沉積過程中兩官能基團之比例控制，將決定幾丁聚醣（chitosan）和成纖維細胞生長因子（FGF-2）等分子在基材表面的固定化可達性。研究中透過馬來醯亞胺-硫醇（maleimide-thiol click reaction）反應以及N-羥基琥珀醯亞胺-胺基（NHS ester-amine coupling reaction）反應，能夠在共聚改質表面上修飾兩種分子，其中chitosan的主要功用為誘導幹細胞聚集而形成球體，並透過協同存在的FGF-2促進基材表面及幹細胞球體內的細胞增殖， 在材料的性質方面，共聚高分子改質表面在附著性與熱穩定性測試下，展現出優異的穩固與耐久性，且該層為一結構均勻而緻密的高分子鍍膜，因此對於周圍的生物環境不存在引起潛在毒性之疑慮，而對於表面之官能化結構比例，也能依照需求在製程中精確地進行控制，並藉由精密的表面化學分析方法得到驗證。在生物功能性的測試下，研究利用培養人類脂肪幹細胞（human adipose derived stem cells）進行一系列實驗，觀察到當幹細胞培養於同時修飾兩種分子chitosan/FGF-2的表面時，細胞將擁有更興盛的生長活性，且隨著時間的成長，不僅能有效地加快細胞數量與球體尺寸的增加，又能在長時間培養後仍維持著高水準的細胞幹性（stemness）。 本研究提供了一套表面改質方法，證實藉由化學氣相沉積製備的雙官能基高分子鍍膜，不論其結構穩定性、化學精確性與協同反應性都是備受肯定的，此外也驗證了化學修飾後表面所擁有之特性，確實有助於促進幹細胞球體的生長與幹性維持，對於生物材料界面與幹細胞研究都是相當有價值的。

Surface modification layers are needed for the precise definition of surface chemistries and are equally important for durable and stable adhesive properties to ensure long-term stability and effective performance for biotechnological applications. This study demonstrates a robust modification layer that is synthesized based on chemical vapor deposition (CVD) copolymerization, and the resultant coating layer is composed of the side-by-side presentation of N-hydroxysuccinimide (NHS) ester and maleimide functionalities with a controlled ratio to define the immobilization accessibility of chitosan and fibroblast growth factor (FGF-2) molecules on the substrate surface for cell culture of human adipose derived stem cells (ADSCs). Characterizations of the copolymer modification layer showed excellent durability including adhesive strength and thermal stability, and the layer is free of concerns for delamination and/or unacceptable deformation/debris formation that can cause potential toxicity to the surrounding biological environment. Modifications using the copolymer layer on the cell culture surface have demonstrated synergistic activity by chitosan to support the formation of spheroids and by FGF-2 to enhance the proliferation of ADSCs within the spheroids while increasing the spheroid size and cell numbers. Healthy and flourishing growth activities were discovered for ADSCs on the modified culture surfaces, and the results are useful for potential and related stem cell research and the interfaces of biomaterials.