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  1. NTU Theses and Dissertations Repository
  2. 生命科學院
  3. 生化科學研究所
請用此 Handle URI 來引用此文件: http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/66408
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dc.contributor.advisor張震東
dc.contributor.authorYueh-Ling Leeen
dc.contributor.author李岳玲zh_TW
dc.date.accessioned2021-06-17T00:34:20Z-
dc.date.available2013-03-19
dc.date.copyright2012-03-19
dc.date.issued2012
dc.date.submitted2012-02-07
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李昱蓉(2010)轉穀氨醯胺酶催化之 HeLa 細胞中組蛋白多胺類修飾。國立台灣大學生化科學所碩士論文。
dc.identifier.urihttp://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/66408-
dc.description.abstract細胞凋亡是遍存於自然界的細胞自我死亡現象,許多作用與如何被調控的機制仍待證明。轉穀氨醯胺酶II、多胺類和多胺類修飾是否牽涉在細胞凋亡過程中,以及被多胺類所修飾受質的身分,一直都是許多文獻想研究的重點。
本研究中,我們使用實驗室製備的抗精胺抗體確定了在 staurosporine 所誘發 HeLa 細胞的細胞凋亡過程中,多胺類修飾是被轉穀氨醯胺酶II的轉醯胺功能和多胺類所調節;且隨著細胞凋亡的情況加劇,多胺類修飾更明顯。加入轉穀氨醯胺酶II的抑制劑:cystamine 後,轉醯胺反應會被抑制,多胺類修飾程度降低,細胞死亡率亦下降,因此判斷轉穀氨醯胺酶II的轉醯胺功能是能促進 HeLa 細胞凋亡。另外發現,細胞內多胺類的含量降低會使轉穀氨醯胺酶II的轉醯胺反應提高,加速細胞凋亡的發生,判斷多胺類具有保護 HeLa 細胞的角色。細胞凋亡過程中,被多胺類所主要修飾的兩個小分子蛋白質(分子量約為 14 kDa 和 20 kDa)的身分也是我們接續研究的重點。
本實驗室之前以蛋白質純化及質譜儀鑑定發現在小鼠組織中 HtrA2/Omi 蛋白質能與精胺結合,此蛋白質為促進細胞凋亡的重要蛋白質。本研究在 HeLa 細胞內確定了 HtrA2/Omi 蛋白質能被多胺類修飾,但被多胺類修飾的生理意義仍須進一步的探討與釐清。
zh_TW
dc.description.abstractApoptosis is an autonomous cell-death phenomenon, whose underlying mecha-nisms remain to be investigated. The involvement of transglutaminse II, polyamine and polyamination in apoptosis, and identities of polyamine-modified proteins have been vigorously studied in recent years.
In this study, we have generated an anti-spermine antiserum and confirm that pol-yamination is regulated by the transamidation activity of transglutaminse II and poly-amine in staurosporine-induced apoptosis in HeLa cells. The increase in polyamination in HeLa cells induced by staurosporine is dose-dependent. Treatment with cystamine, an inhibitor of transglutaminse II, decreased the transamidation activity, polyamination and cell death of HeLa cells. This suggests the transamidation activity of transglutaminse II is pro-apoptosis in HeLa cells. Depletion of spermine level in HeLa cells accelerates apoptosis; this suggests the role of polyamine in HeLa cells is pro-cell survival. The identification of two major polyamine-modified proteins, molecular weight of about 14 and 20 kDa, in apoptosis are in progress.
We have previously identified HtrA2/Omi, an important pro-apoptosis protein, as a spermine-binding protein. In this study, we confirm HtrA2/Omi is a polyamine-modified protein in HeLa cells, but the physiological function of polyamination of this protein requires further investigation.
en
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2021-06-17T00:34:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2012
en
dc.description.tableofcontents中文摘要 i
英文摘要 ii
縮寫表 iv
目錄 vi
第一章 前言
第一節 細胞凋亡(Cell apoptosis 1
第二節 HtrA2/Omi 蛋白質 3
第三節 轉穀氨醯胺酶II(transglutaminase II,TG2) 5
第四節 多胺類(polyamines) 8
第五節 研究目的 9
第二章 實驗材料與方法
第一節 細胞學實驗 11
第二節 DNA fragmentation 12
第三節 MTT [3- (4,5-cimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] assay 12
第四節 蛋白質分析 13
第五節 In vivo transamidation 16
第三章 實驗結果
第一節 細胞凋亡系統建立 17
第二節 細胞凋亡過程中,被多胺類修飾(polyamination)蛋白質的變化 19
第三節 細胞凋亡過程中,轉醯胺反應(transamidation)的變化 21
第四節 轉穀氨醯胺酶II與多胺類調控細胞凋亡過程的角色 21
第五節 細胞凋亡過程中,HtrA2/Omi 蛋白質被多胺類修飾的情形 23
第四章 討論與總結
第一節 轉穀氨醯胺酶II與多胺類皆參與了細胞凋亡的調控 24
第二節 轉穀氨醯胺酶II的轉醯胺功能是促進細胞凋亡(pro-apoptosis)的角色 25
第三節 細胞凋亡過程中,轉穀氨醯胺酶II的轉醯胺功能在不同細胞部位的可能作用 26
第四節 多胺類在細胞凋亡過程中的角色 29
第五節 Staurosporine(STS)引發的細胞凋亡過程中,被多胺類修飾蛋白質身分的確定 30
第六節 HtrA2/Omi 蛋白質被多胺類修飾的可能生理意義 30
第七節 結語 31
第五章 實驗結果圖表
圖一 STS處理 HeLa 細胞24 小時的細胞死亡變化 32
圖二 STS 引發的細胞凋亡過程中,HeLa 細胞內的改變 33
圖三 STS 引發的細胞凋亡過程中,HeLa 細胞內轉穀氨醯胺酶II與多胺類修飾的改變 35
圖四 STS 引發的細胞凋亡過程中,HeLa 細胞內 in vivo transamidation 的現象 37
圖五 STS 引發的 HeLa 細胞凋亡過程中,cystamine 和 denspm 加藥後的細胞死亡變化 39
圖六 STS 引發的細胞凋亡過程中,轉穀氨醯胺酶II和多胺類在其中的角色 40
圖七 STS 引發的細胞凋亡過程中,HtrA2/Omi蛋白質被多胺類修飾的情形 42
參考文獻 43
附錄圖表 47
dc.language.isozh-TW
dc.subject轉穀氨醯胺&#37238zh_TW
dc.subject細胞凋亡zh_TW
dc.subject多胺類zh_TW
dc.subject多胺類修飾zh_TW
dc.subjectHtrA2/Omizh_TW
dc.subjectpolyaminationen
dc.subjectapoptosisen
dc.subjectHtrA2/Omien
dc.subjecttransglutaminse IIen
dc.subjectpolyamineen
dc.title多胺類修飾在細胞凋亡過程中之角色zh_TW
dc.titleThe Role of Polyamination in Apoptosisen
dc.typeThesis
dc.date.schoolyear100-1
dc.description.degree碩士
dc.contributor.oralexamcommittee李明亭,陳宏文,張茂山
dc.subject.keyword細胞凋亡,轉穀氨醯胺&#37238,Ⅱ,多胺類,多胺類修飾,HtrA2/Omi,zh_TW
dc.subject.keywordapoptosis,transglutaminse II,polyamine,polyamination,HtrA2/Omi,en
dc.relation.page54
dc.rights.note有償授權
dc.date.accepted2012-02-08
dc.contributor.author-college生命科學院zh_TW
dc.contributor.author-dept生化科學研究所zh_TW
顯示於系所單位:生化科學研究所

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