(一)利用試管中切割系統篩選MALT1之抑制劑 (二)利用酵母菌尋找MALT1之新功能

Abstract

CBM複合體(CARMA1-BCL10-MALT1)參與在NF-κB活化訊息傳遞中。其中MALT1除了做為鷹架(scaffold)的功能外，也是paracaspase蛋白酶。此外有研究指出ABC-DLBCL淋巴瘤之存活和增生是極度依賴 MALT1的切割活性，所以抑制MALT1活性可作為治療的標靶。本論文第一部分的實驗目的為利用先前實驗室建立的試管中MALT1受質切割系統，來尋找MALT1的活性抑制劑。 首先利用細菌表現並純化His-tag MALT1及BCL10，在系統中確認MALT1可以切割BCL10，而catalytic diad (H415-C464)突變則失去切割活性。另外使用Ac-LRSR-AMC螢光胜肽當做受質，以切割後的發射螢光值來計算MALT1切割活性。在這個系統中， z-VRPR-fmk(已報導的MALT1抑制劑)對MALT1之IC50約12 nM，但z-VAD-fmk (caspase抑制劑) IC50約2 μM。而zVRPR-fmk也能對trypsin造成抑制，且IC50與對MALT1相當(約16 nM)。接著對65個化學物進行篩選，以抑制50%活性為初步門檻，篩選出三個候選藥物IC50約為20 ng/μl。 未來可繼續利用此in vitro系統大量篩選抑制劑，並進一步在in vivo系統中如ABC-DLBCL細胞株進行抑制試驗。 本論文第二部份利用酵母菌來探討MALT1是否具有與YCA1相似的功能。出芽酵母菌具有與人類唯一的paracaspase MALT1序列相似的metacaspase YCA1，已被發現會參與在酵母菌的死亡機制中，也發現能扮演清除細胞內protein aggregates的角色。 首先在H2O2或緩慢加熱刺激後，可觀察到BY4742 Δyca1突變株比野生種的生存率高。然而大量表現YCA1的Δyca1突變株在H2O2處理後生存率卻無降低。將野生種之YCA1 caspase-like domain (CLD)取代為MALT1的CLD對耐受性也無影響。另外，以不同selection marker製備的Δyca1突變株皆不具有比野生種高的耐受性。而BY4741背景之酵母菌也無法證實YCA1參與在酵母菌的死亡機制。 此外BY4742及BY4741背景的Δyca1突變株也觀察不到過去文獻指出的multi-vacuole細胞所佔比例高於野生種2.5倍的現象，starvation刺激後也無法區分差異。因此本部份由於無法重覆YCA1之功能，而無法更進一步探討MALT1。